铁皮石斛(Dendrobium officinale Kiumraet Migo)是一种名贵中药,有着悠久的用药历史,主要有滋阴养颜、强身健体、益胃生津、延年益寿等功效。随着人们生活水平的不断提高,越来越多的人注重保健养生,因此对铁皮石斛需求量大增。铁皮石斛以茎入药,生境特殊,自然繁殖困难,加上无节制的采摘,野生资源已濒临枯竭。虽然铁皮石斛育苗和栽培技术得到突破,但仍不能满足市场的需求。铁皮石斛叶富含黄酮、多糖及生物碱,但多被废弃,造成资源浪费。所以,开发铁皮石斛叶的药用部位价值,实现铁皮石斛的全资源化利用及深加工,既可以满足市场对含铁皮石斛类产品的需求,又能进一步发掘铁皮石斛的潜在医疗及商业价值。本文具体研究结果如下:1、利用高效液相(HPLC)对铁皮石斛叶、茎和花不同部位中黄酮类化合物的成分相关性进行分析,并对其粗提物在五种抗氧化体系(DPPH自由基、羟基自由基、ABTS自由基法、Fe3+还原和Fe2+螯合)下的体外抗氧化活性进行比较。以不同部位的HPLC特征图谱对比,发现叶和花中黄酮类化合物无论是在种类,还是含量上都明显高于茎。在体外抗氧化活性测定中发现,铁皮石斛叶中总黄酮粗提物在羟基自由基清除,ABTS自由基清除和金属螯合上都表现出最强活性,且抗氧化能力具有浓度依赖性。而在DPPH自由基的清除能力和铁离子的螯合能力上花总黄酮活性更强一些。铁皮石斛茎总黄酮粗提物只在金属的螯合能力上表现较好。综合黄酮类化合物的种类和含量,体外抗氧化活性,以及原料的来源和价格等因素,可知铁皮石斛叶更具有开发价值。2、采用单因素分析和Box-Behnken响应面法对超声辅助复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶)法提取叶中总黄酮的提取工艺进行优化。以黄酮类化合物提取率为筛选标准,通过单因素试验,确定了乙醇浓度45%、酶解温度55℃、酶解时间60min和超声时间10 min;以上述单因素条件为基础,进行Box-Behnken响应面实验对部分条件进一步优化,得到最佳提取工艺:液料比(v/m)30:1、复合酶比1.5:1、加酶量1.0%、超声功率120 w。综上条件进行验证,铁皮石斛叶中黄酮类化合物的提取率为1.81%,与预测值相比相对误差为2.71%。本实验所得提取工艺相对稳定,简单易行,可将其用于对铁皮石斛叶总黄酮的提取。3、运用D101型大孔吸附树脂对铁皮石斛叶总黄酮的初步纯化工艺及纯化后抗氧化活性进行研究。以动态吸附率、解吸率和总黄酮含量为衡量标准,研究影响大孔吸附树脂纯化效果的因素,确定最优的吸附-解吸附工艺条件;对铁皮石斛叶总黄酮粗提物与叶总黄酮纯化品,进行抗氧化性对比分析,探究纯化过程对叶总黄酮抗氧化活性的影响。结果表明:铁皮石斛叶中总黄酮的最佳纯化工艺为上样液浓度2.2 mg/mL,上样液体积16BV(Bed volume),上样液pH值2.4,洗脱液80%乙醇,洗脱体积3.25 BV(解吸率达到90.83%),室温下操作,总黄酮含量可达到193.95 mg/g。对铁皮石斛叶黄酮粗提物和纯化晶体外抗氧化性结果进行分析,发现经过初步纯化后的铁皮石斛叶黄酮样品在DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力、铁离子还原能力和金属螯合能力上均有显著提高,清除DPPH、-OH和Fe3+的半数抑制浓度(IC50)分别为 0.1]23、0.1000 mg/mL 和 0.7845 μmol/L,Fe2+螯合能力为 0.6434 mg/mL,其中对DPPH的清除能力最强,即铁皮石斛叶总黄酮具有较强的提供氢原子的能力。D101型大孔吸附树脂适用于对铁皮石斛叶总黄酮的分离纯化,且纯化明显提高了铁皮石斛叶总黄酮的体外抗氧化活性。本文通过对铁皮石斛叶、茎和花中黄酮类成分初步分析,叶黄酮类化合物提取纯化工艺优化,以及体外抗氧化活性深入研究,对铁皮石斛叶黄酮类成分有了较深的认识,认为叶是一种极有开发潜力的资源,其廉价充足的来源和优良的体外抗氧化活性在医药、食品、保健品和化妆品等领域都将有极大发展空间。