目的:在国医大师周仲瑛教授提出的急性脑出血“瘀热阻窍”核心病机基础上,从微观分子角度出发,采用文献、临床、实验研究相结合的方法,以揭示急性脑出血“瘀热阻窍”病机的本质,将微观分子研究与宏观中医辨证理论相结合,可以更好地为急性脑出血阏热证的识别、诊断和疗效机制研究打下基础。方法:1.文献研究:系统整理了古代医家对中风的病机论述及急性脑出血“瘀热”病机生物标志物研究进展。2.临床研究:收集AICH患者271例,根据“瘀热病机量化诊断标准”分为瘀热证组97例和非瘀热组174例,对2组既往史、个人史、家族史、发病诱因、实验室指标和影像学资料进行单因素分析和二元Logistic回归分析,以揭示两者在临床表征上的特点。3.实验研究:纳入AICH“瘀热证”患者、AICH“非瘀热证”患者、正常对照组各4例,分别采集血浆。用TMT结合LC-MS/MS方法对血浆进行蛋白质组学分析,采用方差分析,取两组间蛋白质表达量大于1.3倍且P<0.05的蛋白质为差异蛋白质,共生成三组差异蛋白质数据,即AICH瘀热证/Normal组、AICH非瘀热证/Normal组、AICH瘀热证/AICH非瘀热证组。借助分子网络信息分析方法,针对三组差异蛋白质进行经典通路分析、上游调控因子分析、疾病与功能分析、作用网络分析,从而构建可视化的蛋白质-信号通路-疾病与功能-病机的生物信息图,获得AICH“瘀热证”发病相关的重要生物学信息。结果:1.临床指标空腹血糖增高、凝血酶时间延长与AICH瘀热证呈正相关性。2.与正常对照组相比,AICH“阏热证”的差异蛋白质共识别出21种,分别是:A1BG、ACTN1、APOA4、CA1、CA2、FCGBP、FGA、FGB、GC、GGH、GSN、HBB、IGH、LBP、ORM1、PFN1、PPBP、PRDX2、SDPR、TMSB10、VCL。与差异蛋白质显著性密切相关的通路依次是:LXR/RXR激活通路、肌动蛋白细胞骨架信号通路、FXR/RXR激活通路、急性应激反应信号通路、外源性凝血酶原激活通路。差异蛋白质的上游调控因子有5个,包括IL-6、OSM、STAT3、TGFB1、TP53。与差异蛋白质密切相关的疾病依次是:炎症反应、组织损伤和异常、生殖系统疾病、结缔组织病、发育障碍。差异蛋白质的分子与细胞功能依次是:细胞组装和组织、细胞功能与维护、蛋白质的运输、细胞间的信号与相互作用、自由基清除。获得2个差异蛋白质作用网络,网络1得分41分,与细胞组装与组织、细胞功能与维护、蛋白质运输有关。网络2得分16分,与结缔组织疾病、血液病、遗传性疾病有关。3.与正常对照组相比,AICH“非瘀热证”的差异蛋白质共识别出11种,分别是:APOA4、CA2、CD44、COL14A1、CUL3、GC、GSN、IGH、IGKV2D-29、LBP、ORM1。与差异蛋白质显著性密切相关的通路依次是:LXR/RXR激活通路、FXR/RXR激活通路、动脉粥样硬化信号通路、巨噬细胞IL-12信号通路、急性期应激反应信号通路。差异蛋白质的上游调控因子有2个,包括TP53和脂多糖。与差异蛋白质密切相关的疾病依次是:炎症反应、组织损伤和异常、肾和泌尿系统疾病、结缔组织病、骨骼肌异常。差异蛋白质的分子与细胞功能依次是:脂质代谢、分子输运、小分子生物化学、细胞间的信号和相互作用、细胞运动。获得1个差异蛋白质作用网络,得分28分,与发育障碍、遗传性疾病、代谢性疾病有关。4.与AICH“非瘀热证”相比,AICH“瘀热证”的差异蛋白质共识别出7种,分别是:A1BG、ACTN1、CA1、CD44、CP、PRDX2、VCL。与差异蛋白质显著性密切相关的通路依次是:白细胞外渗的信号通路、蛋白酶细胞力学规律通路、上皮细胞粘附连接重构通路、血管内皮生长因子信号通路、桩蛋白信号通路。差异蛋白质的上游调控因子有2个,包括TP53和毛喉素。差异蛋白质密切相关的疾病依次是:血液病、代谢性疾病、营养性疾病、发育障碍、遗传性疾病。差异蛋白质的分子与细胞功能依次是:细胞形态、细胞间的信号和相互作用、细胞组装与组织、细胞功能与维护、糖代谢。获得1个差异蛋白质作用网络,得分20分,与细胞运动、糖代谢、药物代谢有关。5.AICH瘀热证/Normal组与AICH非瘀热证/Normal组表达相同的蛋白共6个,分别为CA2、GC、ORM1、GSN、LBP、APOA4,两组差异蛋白质共同涉及的信号通路主要有:LXR/RXR激活、肌动蛋白细胞骨架信号、FXR/RXR激活、急性期反应信号、动脉粥样硬化信号等通路。结论:1.空腹血糖增高、凝血酶时间延长可考虑作为AICH阏热证的临床表征指标,为早期识别和早期干预AICH“瘀热病机单元”患者提供依据,改善疾病预后。2.AICH的发生发展与LXR/RXR激活、肌动蛋白细胞骨架信号、FXR/RXR激活、急性期反应信号、动脉粥样硬化信号等通路密切相关,这与目前已知的AICH信号通路研究相符。AICH的生物标志物与APOA4、CA2、GC、GSN、LBP、ORM1有关。3.通过TMT结合LC-MS/MS蛋白质组学方法,AICH瘀热证患者与非瘀热证患者的血浆蛋白质表达在浓度和种类上存在明显差异,瘀热证与非阏热证是两种不同状态。AICH瘀热证患者较非瘀热证患者存在更严重的炎性反应、组织损伤、凝血功能紊乱。4.获得AICH瘀热证“证候相关蛋白质组群”,共计21种差异蛋白,涉及急性反应相关蛋白、脂肪代谢相关蛋白、血液系统与凝血系统激活相关蛋白、细胞运动相关蛋白四类,表明AICH瘀热证的发生与这四类蛋白功能密切相关。根据AICH瘀热证“证候相关蛋白质群”的功能、参与的信号通路和中医辨证关系,构建了蛋白质-信号通路-疾病与功能-病机的生物信息图,从分子层面阐述了 AICH瘀热证可能的作用机制。5.找到了 AICH瘀热证上游调控因子,包括IL-6、OSM、STAT3、TGFB1、TP53。为进一步研究“凉血通瘀方”的药理机制提供依据。6.AICH阏热证与非瘀热证共有7种差异蛋白质表达,分别是A1BG、ACTN1、CA1、CD44、CP、PRDX2、VCL,与炎症反应、细胞运动相关,反映了“瘀热”的本质,我们大胆猜测,这7种差异蛋白质不仅是AICH瘀热证与非瘀热证的差别,也有可能是重型肝炎、消化道出血、急性肾衰竭等疾病中瘀热证与非瘀热证的差别,需要进一步验证。