【摘 要】
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该研究采用分子生物学和免疫细胞化学等方法检测了MN9D细胞中多巴胺的含量、孤儿核受体(Nurr1)基因的表达、蛋白的分布和Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶(TH)的影响,发现MN9D细胞
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该研究采用分子生物学和免疫细胞化学等方法检测了MN9D细胞中多巴胺的含量、孤儿核受体(Nurr1)基因的表达、蛋白的分布和Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶(TH)的影响,发现MN9D细胞在正常情况下可以合成多巴胺,并表达TH和Nurr1基因;Nurr1蛋白主要分布在细胞胞浆中,过表达Nurr1的MN9D细胞TH表达增高.该研究结果提示MN9D细胞具有多巴胺能神经元的特点,Nurr1可以促进体外培养的多巴胺能细胞的TH的产生,可以用作基因治疗帕金森病的侯选基因.该研究还采用腺病毒辅助病毒AAVhelper-free系统,成功构建了携带有Nurr1基因的重组腺病毒辅助病毒载体pAAV- Nurr1,与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒phelper一起经磷酸钙法共转染HEK293包装细胞,获得了高滴度的具有感染活力的重组AAV- Nurr1和AAV-LacZ病毒颗粒,经测试,滴度可以达到10<12>阳性细胞/ml病毒贮存液,具有感染活性.同时,该研究在体外分离培养了大鼠骨髓基质细胞,经重组AAV病毒感染,约有60﹪以上的细胞表达目的基因.该研究结果为应用Nurr1为治疗基因、腺病毒辅助病毒为载体、骨髓基质细胞为运载细胞对帕金森病进行基因治疗研究提供了新的思路.
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