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目的：树突状细胞(Dendritic cells, DCs)因其在抗肿瘤免疫中的重要作用而成为恶性肿瘤生物治疗研究热点之一。DCs在抗肿瘤免疫反应中分泌大量白细胞介素12(Interleukin 12,IL-12)：既促进T细胞分泌干扰素γ(Interferonγ,IFN-γ)发挥抗肿瘤作用，又诱导Th0向Th1分化[1]。这是DCs激发抗肿瘤免疫的主要机制之一。DCs分泌IL-12异常，抗原提呈功能降低，IFN-γ分泌减少，Th1/ Th2分化发生偏移，则使机体免疫监视能力降低，这可能是机体异质化细胞得以逃遁、成瘤、转移和复发的主要原因之一[2]。作为诱导肿瘤特异性免疫应答的主要细胞因子之一，IL-12虽然在局部或全身直接应用能够发挥其抗瘤作用，但由于严重的不良反应限制其推广[2]，如果将其基因导入免疫细胞使其自行分泌，这样免疫突触局部形成一个持续高浓度的分泌IL-12微环境，有利于免疫反应的激发和维持，又可减少局部或全身直接应用IL-12的不良反应。具有免疫活性(野生型)的IL-12(p70)是由两个不同基因(p35和p40)编码的两个亚单位以1∶1比例构成的异二聚体蛋白分子(p70)，更为重要的是，p40过量表达造成p40和/或其同源二聚体[p(40)2]竞争性与p70特异性受体结合，反而阻断了p70生物学活性的发挥。将p40和p35重组到同一载体的同一启动子的下游并导入DCs，以期既提高p70的表达又可避免p40或p(40)2的潜在威胁[3]。由此，我们设想构建重组人单链白细胞介素12(Recombinant human single chain interleukin 12,rhscIL-12)的重组体，并将其与真核表达载体再重组。将rhscIL-12基因导入DCs，以期纠正这种异常或正向加强DCs的免疫功能，强化机体的细胞免疫，观察rhscIL-12转染DCs免疫效能的改变，为转基因DCs抗肿瘤疫苗的临床应用提供理论依据。方法：构建rhscIL-12和逆转录病毒载体的重组体，脂质体介导转染人外周血来源DCs，以 GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导、培养转染细胞，以流式细胞仪、ELISA和PCR分析细胞表型改变、IL-12和IFN-γ表达以及IL-12和IFN-γ在细胞免疫反应中相互关系、观察IL-12基因转染DCs对特异性Th细胞发育、分化，及特异性CTL诱导和功能的影响[4]。结果：rhscIL-12和逆转录病毒构成的重组体可转染真核细胞，rhscIL-12在宿主细胞内有效表达；被感染细胞内无病毒复制；在GM-CSF，IL-4 and TNF-α作用下，来源于人外周血的单个核细胞发育成为高表达CD83（86%）的DCs，光镜和电镜观察具<WP=8>有典型形态，流式细胞仪动态观察其表型显示，早期DCs主要表达CD83，随着DCs的成熟，其CD80表达上调；rhscIL-12转染DCs，进一步上调DCs CD80的表达，提高DCs对T细胞的刺激能力，大量促进T细胞增殖并分化为CTL；同时诱导Th0向Th1分化，Th1分泌大量IFN-γ从而发挥其抗肿瘤作用。结论：逆转录病毒载体是体外转染DCs的首选载体之一；rhscIL-12与逆转录病毒构建的重组体是用IL-12进行生物治疗有效可行的手段； rhscIL-12体外转染DCs能上调DCs共刺激分子表达，增强DCs对T细胞的增殖作用，诱导CTL同时Th0向Th1分化，加强机体抗肿瘤免疫效应；在MLR中IFN-γ的产生与来源于DCs内源性IL-12呈正相关，而与外源性的IL-12无相关性。