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目的：肾小球肾炎发病机制的研究目前仍停留在体内免疫功能紊乱上，且发病机制之间尚存在一些相互矛盾之处。本实验拟对控制免疫应答的基因-Ir基因(immuneresponsegeneI-Eβ片段)进行研究，探讨其与小鼠膜性肾小球肾炎(membranousglomerulonephritis，MGN)发病机制的关系，以期论证Ir基因在肾炎发病中的重要地位和作用，揭示其分子病理学发病机制。
方法：1、复制与鉴定小鼠膜性肾小球肾炎动物模型：按照Border[1]方法，制备阳离子化牛血清白蛋白(cationicbovineserumalbumin，C-BSA)。选用近交系BLAB/c小鼠30只，20±2g，雌雄对半，随机分为实验组和对照组二组，实验组隔日尾静脉注射C-BSA0.2ml，于注药三周始每周每只检测2次小鼠尿蛋白，四周末杀检，进行光镜、电镜、免疫荧光染色鉴定。对照组小鼠隔日注射0.2ml磷酸盐缓冲溶液(phosphatebufferedsolution，PBS液)，进行全程对照。
2、以逆转录多聚酶链反应(reversetranscriptionpolymerizechainreaction，RT-PCR)方法扩增并鉴定I-Eβ基因：随机选取上述膜性肾病动物模型实验组和对照组小鼠，分别作为检测I-Eβ基因序列的实验组和对照组，取每只小鼠脾脏组织50mg，充分捣碎，加入Trizol试剂提取总核糖核酸(ribonucleicacid，RNA)，经紫外分光光度计测定光密度(opticaldensity，OD)OD260/OD280的比值，计算出各组的RNA的浓度与纯度，并用1％琼脂糖凝胶电泳检测RNA分子的完整性，利用RT-PCR技术和随机引物将总RNA逆转录成反向转录脱氧核糖核酸(complementarydeoxyribonucleicacid，cDNA)，选取I-Eβ基因cDNA全序列，设计基因特异性引物在PCR仪上进行体外扩增。以小鼠磷酸甘油醛脱氢酶(gluceraldehydephosphatedehydrogenase，GAPDH)基因进行对比。
3、设计扩增产物内部特异性引物，以测序仪检测PCR产物，得出I-Eβ基因序列。
4、测序结果与DNA序列峰图核对后，在BLAST上进行双重序列对比，以及clustalx1.83多重序列对比。以杂合突变数进行统计处理。
结果：1、以Border方法制备阳离子化牛血清白蛋白，小鼠尾静脉注射制备动物模型稳定可靠；
2、用Trizol试剂提取总RNA，所提RNAOD2一OD280在1.8～2.0之间，浓度在542.0ng/μl左右。1％琼脂糖凝胶电泳显示RNA电泳图的5S、18S、28S三条带型整齐，无明显拖尾及弥散，说明RNA结构完整，无明显降解。
3、逆转录PCR扩增实验组和对照组均有目的基因I-Eβ基因和内参对照GAPDH基因的cDNA产生，PCR产物电泳与脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid，DNA)分子Marker相比示：扩增产物大小分别在750～1000bp和100～250bp之间，与预定理论值849bp和201bp大小符合。
4、PCR产物检测序列，送检20例，其中16例峰图明显，杂带较少，可获得清晰序列，其序列在BLAST上与正常序列对比，结果符合率100％；以clustalx1.83进行多重序列对比，结果也无明显差异性。另外4例杂峰、杂带突出，无法辨认序列。
5、杂合突变分析显示：实验组共测出碱基3704bp，其中有8bp发生杂合突变，突变率为1.890‰；对照组测出3755bp，其中有1bp发生杂合突变，突变率为0.266‰。
6、杂合突变情况与PCR扩增致突变率1/105比较，实验结果符合Poisson分布，根据Poisson分布的小概率事件原理，作出统计推断，实验数据以SPSS11.5forwindows进行处理，结果：实验组P(x≥8)=1.11E-16，P远小于0.01,差异有统计学意义，故可认为实验组杂合突变率高于PCR扩增所致突变率，其原因可能为实验组在实验过程中发生了突变；对照组P(x≥1)=0.007，P小于0.01，差异有统计学意义，故可认为对照组杂合突变率高于PCR扩增所致突变率，其原因可能为对照组可能在实验过程中发生了突变。实验组和对照组进行对比，结果进行四格表X2检验，实验数据用SPSS11.5forwindows进行处理，结果X2为5.553，P值为0.018(α＜0.05)，差异有统计学意义。故可认为实验组杂合突变率高于对照组，其原因可能与膜性肾病的发生有关。7、对9例杂合突变进行分析发现，实验组8例突变中，有2例杂合突变同时发生在I-Eβ基因β1外显子第20位碱基上，均为胸腺嘧啶/腺嘌呤(thymine/adenine，T/A)杂合突变。而正常该位点应为胸腺嘧啶。对照组该位点无突变发生。进一步对该位点进行分析发现，实验组和对照组该位点T峰均有降低。测出的16例序列，T峰下的干扰峰中12例均有腺嘌呤(adenine，A)干扰峰的出现，其中实验组6例，占实验组总测出例数的85.71％；对照组6例，占对照组66.67％。可以看出该位点A碱基干扰峰发生率实验组高于对照组，由于例数不多，统计上无意义，需要进一步的研究证实。而9例序列该位点干扰峰中7例有胞嘧啶(cytosine，C)的出现，发生率为77.78％；而实验组中6例仅有1例有C的出现，发生率为16.67％，列出四格表，进行X2检验，X2=6.349，P=0.012(α＜0.05)，差异有统计学意义，故可认为该位点C干扰峰发生率实验组低于对照组。
结论：1、小鼠I-Eβ基因的分离和鉴定是许多后续研究的前提。
2、I-Eβ基因在实验性膜性肾病小鼠中杂合突变率增高，可能和小鼠膜性肾病发生有关，为进一步的研究奠定了基础。
3、I-Eβ基因β1外显子第20位碱基为可疑突变点。