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目的:
本研究通过检测类风湿关节炎(RA)患者外周血中Th17细胞的表达水平并且探讨Th17细胞在RA发病机制过程中的作用。在此基础上,进一步观察治疗RA的两种常用药物来氟米特和地塞米松对RA患者外周血Th17细胞的影响,以及探讨这两种药物是否通过影响Th17细胞治疗RA。
方法:
肝素抗凝管收集己确诊的RA患者外周静脉全血,利用Ficoll密度梯度法分离出单个核细胞(PBMCs),采用免疫磁珠法阴选出CD4+T辅助细胞(Th)。(1)利用细胞内荧光染色的方法标记CD4+T细胞中Th17细胞的特异细胞因子IL-17,流式细胞术(FCM)测定Th17细胞占整个Th的比率;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)测定Th17细胞IL-17以及特异性转录因子ROR-γt的mRNA表达水平。(2)将分离到的CD4+T辅助细胞分别与不同剂量的来氟米特活性代谢产物A771726(15、30、60μg/ml)和地塞米松(10-6、10-7、10-8mol/L)共培养24小时,FCM检测药物干预过的RA患者外周血Th17/Th百分率;同时应用RT-PCR技术检测IL-17、ROR-γtmRNA表达水平。
结果:
与健康对照组相比,RA患者组外者血中的Th17细胞显著增高。并且体外实验也表明,A771726对RA患者外周血Th17细胞无抑制作用,对IL-17、RORγtmRNA表达水平也无明显抑制作用;而地塞米松可以使Th17细胞和IL-17、RORrtmRNA水平明显减少,并且随着作用药物浓度的增加这种抑制作用更加明显。来氟米特对Th17细胞在CD4+T细胞中的百分比无明显影响,而地塞米松可以降低Th17细胞百分比。
结论:
和健康人相比,类风湿关节炎外周血Th17细胞异常增高,表明Thl7细胞及与其相关的细胞因子可能参与了RA患者疾病发生发展过程。治疗RA的临床常用药物来氟米特可能对RA患者外周血Th17细胞百分比并无影响,表明其并非通过影响Th17细胞的作用机制治疗RA;而地塞米松对Th17细胞有显著的抑制作用,其可以降低Th17在CD4+T细胞中的百分比,表明地塞米松可能通过影响Th17细胞治疗RA。