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目的:皮肌炎（dermatomyositis,DM）是特发性炎性肌病的一种亚型,临床上主要表现为肌肉和皮肤的损害。DM患者的肌肉区域的毛细血管通常表现为坏死、缺血和微梗死,进而导致肌肉纤维损伤。肌肉活检显示,CD4+T细胞、B细胞和巨噬细胞等浸润性炎症细胞主要存在于DM患者的血管周围和肌束膜区域。2017年,Deepak A.Rao等人在类风湿关节炎患者滑膜液中首次发现了一种新型CD4+T细胞亚群,定义为“外周辅助性T细胞”（T peripheral helper,Tph）。研究发现,外周血Tph细胞在多种自身免疫性疾病患者中都存在异常表达情况,且在Ig G4相关性疾病患者炎症浸润性颌下腺组织中发现发挥细胞毒性作用的CX3CR1+Tph细胞,这些都提示Tph细胞可能与自身免疫性疾病的发病机制有关。因此本研究的目的旨在探讨DM患者中Tph细胞是否存在异常表达情况,探讨这类细胞在患者炎症浸润性肌肉组织中发挥的作用及其可能的机制。实验方法:1.皮肌炎患者外周血和肌肉组织中TPH细胞表达情况的研究收集初治DM患者的新鲜外周血、肌肉组织和临床资料,同时收集性别、年龄相匹配健康志愿者的外周血和非炎症性肌病患者的肌肉组织作为对照。流式细胞术检测外周血Tph细胞比例,分析外周血Tph细胞比例与DM患者临床指标之间的相关性。免疫组化法检测肌肉组织中Tph细胞和B细胞的表达。2.CX3CR1+TPH细胞在皮肌炎中的作用及其机制的研究收集初治DM患者的新鲜外周血、肌肉组织和临床资料,同时收集性别、年龄相匹配健康志愿者的外周血和非炎症性肌病患者的肌肉组织作为对照。流式细胞术检测外周血CX3CR1+Tph细胞比例,分析外周血CX3CR1+Tph细胞比例与DM患者临床指标之间的相关性。免疫组化法检测肌肉组织中CX3CR1+Tph细胞的表达。磁珠分选出DM患者的CD4+T细胞进行体外培养,外源性加入不同浓度的人CX3CL1重组蛋白（50 n M,100 n M）、JAK2阻断剂巴瑞替尼处理,CCK8检测CD4+T细胞的细胞活性;加入不同浓度的人CX3CL1重组蛋白（50 n M,100 n M）处理,流式细胞术检测CX3CR1+Tph细胞比例。进一步分选出DM患者的CX3CR1+CD4+T细胞,加入人CX3CL1重组蛋白（100 n M）、JAK2阻断剂巴瑞替尼处理,流式细胞术检测IFNγ+CX3CR1+Tph细胞比例,Western Blot检测JAK2和STAT1的磷酸化水平;加入不同浓度的人CX3CL1重组蛋白（50 n M,100 n M）处理,ELISA检测趋化因子CXCL13表达水平。采用Transwell小室将DM患者的CX3CR1+CD4+T细胞和B细胞共培养,加入人CX3CL1重组蛋白（100 n M）处理CX3CR1+CD4+T细胞,流式细胞术检测B细胞的趋化情况。结果:1.皮肌炎患者外周血和肌肉组织中TPH细胞表达情况的研究DM患者外周血Tph细胞比例较健康人显著降低,与血清ESR、IL-6、IL-10水平呈负相关,与CD3+、CD4+、CD8+T细胞绝对计数呈正相关。经糖皮质激素治疗后,DM患者Tph细胞比例升高。DM患者肌肉组织中Tph细胞和B细胞表达增多,且增多的B细胞积聚于Tph细胞周围。2.CX3CR1+TPH细胞在皮肌炎中的作用及其机制的研究DM患者外周血CX3CR1+Tph细胞比例较健康人显著降低,与血清LDH、IL-10白细胞水平呈负相关。浸润DM患者肌肉组织中Tph细胞主要为CX3CR1+Tph细胞。在DM患者外周血CD4+T细胞培养中,不同浓度的人CX3CL1重组蛋白（50 n M,100 n M）及巴瑞替尼不影响CD4+T细胞的存活。随着人CX3CL1重组蛋白浓度增加（50 n M,100 n M）,CX3CR1+Tph细胞比例逐渐升高。在DM患者外周血CX3CR1+CD4+T细胞培养中,与空白对照组比较,高浓度CX3CL1处理组（100 n M）JAK2、STAT1磷酸化水平显著增高,流式细胞术检测IFNγ+CX3CR1+Tph细胞比例显著升高;而加入JAK2抑制药巴瑞替尼后,JAK2、STAT1磷酸化水平无显著性变化,流式细胞术检测IFNγ+CX3CR1+Tph细胞比例也无明显变化。用Transwell小室将DM患者CX3CR1+CD4+T细胞和B细胞共培养,加入高浓度人CX3CL1重组蛋白（100 n M）刺激下室CX3CR1+CD4+T细胞,流式细胞术检测迁移至下室的B细胞数量,结果发现与空白对照组相比,高浓度CX3CL1处理组（100 n M）的B细胞迁移能力增强。随着CX3CL1浓度增加（50 n M,100 n M）,检测CX3CR1+CD4+T细胞培养上清液中趋化因子CXCL13水平升高。结论:1.皮肌炎患者外周血和炎症性肌肉部位Tph细胞存在异常表达情况,在肌肉组织中,增多的B细胞聚集于Tph细胞周围。这说明Tph细胞可能在皮肌炎患者炎症性肌肉组织T-B细胞的相互影响中具有重要作用。2.CX3CR1+Tph细胞作为皮肌炎患者炎症性肌肉组织中存在的主要Tph细胞,一方面通过JAK2-STAT1通路促进了IFN-γ的表达,另一方面通过产生趋化因子CXCL13促进B细胞的趋化,这可能为皮肌炎的治疗发展提供新的方向。