B族链球菌(GroupBStreptococcus，GBS)寄生于育龄妇女的泌尿生殖道，主要引起围产期孕妇和新生儿的侵袭性感染，是新生儿的主要死因之一。最近的研究显示新生儿GBS感染所致的死亡率仍然居高不下，制备安全而有效的GBS疫苗是降低感染的有效方法之一。 利用GBS表面蛋白作为疫苗的有效成分在大多数动物试验中得到证实。研究表明GBS表面蛋白C5a肽酶(streptococcalC5apeptidasefromgroupBstreptococcus,SCPB)和表面免疫相关蛋白(surfaceimmunogenicprotein,SIP)存在于各种GBS血清型，具有一定的毒力和免疫原性，有望成为理想的GBS疫苗成分。本研究重点研究SCPB蛋白的免疫表位和各功能区域的重组表达，及其免疫原性的初步探索，探讨其在细菌感染免疫保护中的作用，为亚单位疫苗的制备、免疫防护及免疫致病机制的研究提供基础资料。研究常见致病血清型GBSⅡ型菌株的SIP蛋白的表达，为进一步的蛋白结合疫苗研究奠定基础。 通过计算机表位预测软件，Propred和EMBOSS分别预测SCPB蛋白的MHC结合肽和B细胞表位，证实SCPB蛋白88-276AA肽段包含了预测分值较高的两种表位，结合对SCPB蛋白的功能区域的分析，我们确定分段表达SCPB蛋白的四个功能区域。 SCPB蛋白的分段克隆、重组表达研究。合成不同功能区域基因的特异性引物，提取GBS基因组DNA为模板进行PCR扩增，回收扩增的基因片段后与T载体连接，转化大肠杆菌XL-1blue。增菌后提取质粒，通过双酶切回收目的基因片段与相同酶切的PET32a+质粒载体相连接。连接产物转化大肠杆菌BL-21,IPTG诱导表达。Western-blot和质谱分析表明可溶性的重组蛋白已经在上清正确表达。表达产物经过镍柱纯化。 SCPB重组蛋白的免疫原性分析。重组蛋白皮下免疫C57/BL小鼠，通过ELISA检测特异性抗体的水平，初步评估重组蛋白的免疫原性。试验表明，在四个功能区域中，信号肽及酶活性区域1-575AA，去掉穿膜结构的519-1117AA区域以及酶活性区域88-570AA,与纤维结合素结合的区域，即88-276AA肽段均检测到特异性的抗体，具有较强的免疫原性，可以作为进一步亚单位疫苗的研究对象。纤维结合素结合的区域，即88-276AA肽段可能是SCPB蛋白的重要抗原表位之一。 GBSⅡ型是我国主要的致病血清型之一，我们从中克隆出sip基因，构建和原核表达重组SIP蛋白。根据公布的sip基因序列设计引物，以GBS基因组DNA为模板通过PCR扩增出GBSSS-619株的sip基因，通过测序得出GBSSS-619Ⅱ型菌株的sip序列，报GeneBank基因序列库；构建重组表达质粒pET-SIP,IPTG诱导表达重组SIP蛋白，并初步纯化，为进一步的蛋白结合疫苗研究奠定基础。 结论：1.筛选出了SCPB蛋白的优势表位区域。 2.原核表达和纯化了筛选的表位区和SCPB蛋白不同的功能区域，为下一步的研究提供了候选蛋白。 3.动物试验表明，重组的SCPB蛋白的四个功能区域均具有较强的免疫原性，可以作为亚单位疫苗的研究对象，与纤维结合素结合的区域可能是重要的免疫表位之一。 4.从Ⅱ型GBS菌株中扩增出sip基因，并成功构建和原核表达了SIP蛋白，为本单位下一步相关疫苗的研究奠定了基础。