黄花蒿再生体系优化及细胞学研究

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传统中草药黄花蒿(Artemisia annua L.)为菊科(Asteraeeae or Compositae)蒿属植物,从黄花蒿中提取的青蒿素及其衍生物是起效快、疗效好、安全性高的抗疟药,具有广泛的应用前景。黄花蒿的种植,青蒿素的合成、代谢和作用机理有较多的研究,但黄花蒿细胞学的研究较少。本研究以湖南农业大学研究基地培育的黄花蒿为材料,优化了黄花蒿的再生体系,通过石蜡切片等方法从细胞学水平上阐明了黄花蒿快繁的发育过程,初步探究了腺毛与青蒿素含量的相关性,结果如下:1.优化了黄花蒿的快速繁殖体系外植体消毒:黄花蒿叶片、花序的最佳消毒方式均70%乙醇20s,0.2%Hg Cl2溶液8 min,污染率分别为1.67%,13.33%,存活率分别为98.3%,86.67%;芽作为外植体的最佳消毒方式为70%乙醇20s,0.2%Hg Cl2溶液10 min,污染率为0,存活率可达91.67%。愈伤组织诱导:幼嫩叶片、花序作为外植体,愈伤组织诱导最佳培养基分别为MS+6-BA 0.5 mg/L+ZT 0.5 mg/L,MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L,诱导率分别达74.19%,45.94%。丛生芽诱导:嫩芽作为外植体,丛生芽诱导最适培养基为MS+ZT 2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L,诱导率为55.93%。叶片和花蕾来源的愈伤组织,丛生芽诱导最适培养基为MS+KT 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率为23.68%。丛生芽增殖与不定根诱导:丛生芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,增殖倍数可达8.6。丛生芽生根的最佳培养基为1/2MS+NAA 0.3 mg/L+蔗糖40 mg/L,生根率可达100.0%。2.黄花蒿体细胞胚、丛生芽和不定根分化的细胞学过程体细胞胚途径分化:幼叶表皮细胞向外分裂形成分生组织细胞团,分生组织细胞团分化形成原胚。原胚向各方向分裂,经过球形胚、心形胚和鱼雷形胚阶段后发育为成熟胚。丛生芽分化:愈伤组织局部区域细胞体积变小形成分生组织细胞团,分生组织细胞团顶端细胞逐步分化形成生长锥。生长锥周围的细胞突起发育成叶原基,生长锥下方的细胞生长分化,芽体生长,叶原基数量增加。早期形成的叶原基发育形成幼叶,生长锥后部芽轴细胞分化形成茎的结构,从而形成结构完整的丛生芽。不定根分化:根原基主要起源于茎的维管形成层,部分愈伤组织也可以直接分化出根原基。3.黄花蒿腺毛显微观察与青蒿素含量的相关性分析以高含量黄花蒿品种(428-A)不同株系为材料,分析了腺毛发育与青蒿素含量的关系。黄花蒿叶片下表皮腺毛密度均高于上表皮毛腺毛密度,且与青蒿素含量、腺毛发育相关Aa MYB5和Aa ETC2基因的表达呈正相关。
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