HBsAg和B19 VP2复合抗原的基因克隆及表达

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背景与目的: 人微小病毒B19(Human Parvovirus B19)是微小病毒科微小病毒属中目前已知的唯一使人类致病的病毒,也是动物病毒中体积最小结构最简单的DNA病毒。主要经呼吸道和血液途径传播,可引起社区局部流行。自1990年首次证实我国存在该病毒后,陆续报告B19病毒感染是我国孕妇非免疫性流产、儿童急性再障危象、急性血小板减少性紫癜等疾病的重要病因之一。现己证实该病毒同多种儿童及成人疾病有关。同时,我国妇女和儿童血清中保护性抗体水平低,易发生该病毒感染。尤其免疫功能低下或缺陷患者可发生持续感染和慢性贫血,危及生命。且随着检测手段的改进及研究的深入,其疾病谱还在不断扩大。B19病毒基因组长约5.6kb,编码两个结构蛋白(VP1和VP2)及一个主要的非结构蛋白(NS1)。B19病毒衣壳蛋白主要由VP2蛋白组成,VP1蛋白不超过衣壳蛋白的10%,其独特区暴露在病毒的表面。B19病毒感染引起的机体免疫反应主要是针对其结构蛋白VP1和VP2,而VP1除在其氨基端有—227个氨基酸的独特区外,其余与VP2相同。乙型肝炎病毒(HBV)的感染在人群中比例很高,且感染后体内能形成的主要保护性抗体为针对表面抗原(HBsAg)的表面抗体(抗-HBs)。本课题的目的是选择B19-VP2抗原基因和HBsAg基因重组,利用pGEX-5X-1原核表达载体表达,从而建立表达B19和HBV复合抗原系统,并检测此复合抗原的抗原性,给HBV和B19病毒重组多价疫苗的研制和复合诊断试剂提供抗原。 方法: 根据GenBank收录的HBV及B19病毒序列,设计PCR引物,并在每条引物前分别加入一定的内切酶位点。利用PCR和分子克隆技术,从含HBV病毒全基因的重
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