小鹅瘟的病原为小鹅瘟病毒(Goose parvovirus, GPV),主要导致雏鹅发病,该病传播快,死亡率高,制约着鹅业养殖的健康发展。现有弱毒活疫苗和小鹅瘟抗体的广泛应用,在我国小鹅瘟疫病防控过程中发挥了巨大的作用。伴随着分子生物学技术的发展和疫苗产业化工艺的的革新,基因工程亚单位疫苗成为一种新型广泛推广应用的候选疫苗。基因工程亚单位疫苗具有生产成本低、抗原含量高、无外源病毒、无毒力返强的优势。本研究针对小鹅瘟的保护性抗原VP3结构蛋白,选取B细胞抗原表位富集区,开展原核表达、规模化发酵制备及其免疫原性研究工作,以期制备的亚单位抗原在小鹅瘟疫病的综合防控过程中,发挥其应有的作用,积极推进小鹅瘟疫病的净化。在山东地区开展了小鹅瘟的流行病学调查,采集山东地区某规模化养殖场疑似小鹅瘟病料,开展了GPV的分离鉴定、鹅胚中增值特性、3日龄雏鹅攻毒试验、中和试验、GPV VP3基因序列分析等工作；通过一系列的鉴定工作证实证实成功分离一株GPV毒株,该病毒第5代培养物鹅胚增殖死亡的高峰为96 h,其ELD50为10-6.32/0.2 mL,对3日龄雏鹅具有较强的致病性,LD50为10-2.2866/0.2 mL；该分离株克隆测序获得的VP3基因序列,与国内外参比毒株的同源性均在95.8%以上,推导的氨基酸同源性在97.5%以上,命名该GPV毒株为BZ株。为了获得高效表达且具有免疫原性的小鹅瘟亚单位抗原,以GPV BZ株为模板,分析预测GPV结构蛋白VP3的B细胞抗原表位分布,并选中预测的一段抗原表位富集区为研究目标,将其成功克隆构建了pET-32a-VP3原核表达载体,在实验室条件下实现了VP3-2蛋白的可溶性表达,可溶性的VP3-2蛋白免疫SPF鸡制备抗血清,中和效价能够达到10-1.91,说明该重组GPV亚单位蛋白抗原具有很好的中和抗体产生能力。为了实现具有良好免疫原性的GPV VP3-2蛋白的大规模生产,本研究通过细菌发酵罐培养技术,开展VP3-2蛋白的高密度发酵工作。高密度发酵研究证实,溶氧反馈控制补料适合VP3-2蛋白的规模化生产：通过在发酵过程中溶氧反馈补充调节葡萄糖溶液,控制溶氧水平分别在60%(0-4 h)、30%(4-10 h),使乙酸积累量大大降低至0.716g/L,细胞的吸光度(OD600)数值为2.256,VP3-2蛋白包涵体产量为85.64 mg/L。通过“溶氧反馈-分阶段控制”补料方案,实现了GPV VP3-2蛋白高效表达。高密度发酵表达的小鹅瘟亚单位抗原VP3-2蛋白产物为包涵体,为此开展了该蛋白变性复性工艺优化工作,形成了以CBS (pH9.6)为缓冲液、6M的尿素为变性剂、稀释复性的抗原后续处理工艺,质量检验证实该工艺成功制备了具有良好免疫原性的亚单位疫苗抗原；以复性的VP3-2蛋白作为疫苗抗原,配制了小鹅瘟蜂胶亚单位疫苗,进行了常规检验及安全性检验、效力检验、抗体持续期检验等,证实原核表达的VP3-2蛋白能够作为新型小鹅瘟疫苗的候选抗原。