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目的：以特异性的抑制剂阻断OCT3、P-gp活性，观察转运蛋白OCT3、P-gp在NRF2基因介导的A549细胞百草枯抗性中的作用。
方法：
1.构建Ad-NRF2腺病毒载体，并通过Western blot和RT-PCR技术检测NRF2的表达情况。
2.对膜转运蛋白OCT3活性在NRF2基因介导的百草枯抗性中的作用研究:实验分为如下12组:空白对照组、Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、PQ组、PQ+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、PH（OCT3抑制剂）组、PH（OCT3抑制剂）组+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、PQ+PH组、PQ+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组+PH（OCT3抑制剂）+PQ组、Ad-NRF2组、PQ+Ad-NRF2组、PH+Ad-NRF2组、PQ+Ad-NRF2+PH组。重组腺病毒Ad-NRF2转染A549细胞后，以特异性的抑制剂阻断OCT3活性，通过高效液相色谱法检测A549细胞暴露于百草枯48h后细胞内百草枯浓度，并通过ELISA、Western blot及Real-Time PCR检测各组A549细胞IL-6、TNF-α、NRF2、OCT3蛋白表达量及NRF2、OCT3的mF.NA表达情况。
3.对膜转运蛋白P-gp活性在NRF2基因介导的百草枯抗性中的作用研究:实验分为如下12组:空白对照组、Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、PQ组、PQ+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、Cy（P-gp抑制剂）组、Cy（P-gp抑制剂）+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组、PQ+Cy（P-gp抑制剂）组、PQ+Ad-NRF2RNAi阴性对照序列组+Cy（P-gp抑制剂）、Ad-NRF2组、PQ+Ad-NRF2组、Ad-NRF2+Cy（P-gp抑制剂）组、PQ+Ad-NRF2+Cy(P-gp抑制剂)组。重组腺病毒Ad-NRF2转染A549细胞后，以特异性的抑制剂阻断P-gp活性，通过高效液相色谱法检测各组A549细胞暴露于百草枯48h后细胞内百草枯浓度，并通过ELISA、Western blot及Real-Time PCR检测各组A549细胞IL-6、TNF-α水平、NRF2、P-gp蛋白表达量及的NRF2、P-gp的mRNA表达情况。
结果：
1.Ad-NRF2腺病毒感染HEK293细胞后，通过RT-PCR及Western Blot结果显示NRF2的表达量腺病毒组比空白对照组增加。
2.与对照组相比，NRF2过表达组可上调暴露48小时A549细胞膜OCT3蛋白的表达水平;可明显降低暴露48小时A549细胞内PQ含量;同时可明显降低48小时A549细胞TNF-α、IL-6表达水平。给予PH(OCT3抑制剂)48h后，A549细胞膜OCT3蛋白的表达量上升;同时A549细胞内PQ升高;同时A549细胞TNF-α、IL-6表达升高。
3.与对照组相比，过表达的NRF2可明显上调暴露48小时A549细胞膜P-gp mRNA及蛋白的表达水平;可明显降低暴露48小时A549细胞内PQ含量;同时可明显减低48小时A549细胞TNF-α、IL-6表达水平。给予Cy(P-gp抑制剂)48h后，A549细胞膜P-gp mRNA及蛋白的表达量上升;同时A549细胞内PQ升高;同时A549细胞TNF-α、IL-6表达升高。
结论：过表达RF2基因可影响A549细胞膜转运蛋白OCT3、P-gp活性，降低A549细胞内的百草枯浓度，减轻百草枯诱导细胞的炎症反应及氧化应激损伤。特异性抑制剂阻断OCT3、P-gp活性可逆转过表达NRF2基因对细胞的保护作用。