【摘 要】
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本研究从人粒细胞中分离纯化获得了天然同源二聚体HNL/NGAL标准品。以接受心脏外科手术的成年患者为研究对象,采用放射免疫法(RIA)同时测定了手术前和手术后2h、24h、48h及72
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本研究从人粒细胞中分离纯化获得了天然同源二聚体HNL/NGAL标准品。以接受心脏外科手术的成年患者为研究对象,采用放射免疫法(RIA)同时测定了手术前和手术后2h、24h、48h及72h尿液、血清和血浆HNL/NGAL浓度。结果显示尿HNL/NGAL可用于急性肾损伤(AKI)的早期诊断;血清和血浆HNL/NGAL浓度可以反映肾功能状况,但不能用于AKI的早期诊断。共建立了7种基于不同抗体的HNL/NGAL夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。通过比较RIA和ELISA测得的尿HNL/NGAL浓度的相关性及其与肾功能指标的关系,首次提出抗体的选择可能对HNL/NGAL免疫学测定方法产生重要影响。利用RIA和ELISA测定了尿液层析产物及临床尿液样品,通过Western-blotting分析了各种抗体与不同分子形式HNL/NGAL的反应特性,结果进一步证明了抗体对HNL/NGAL测定方法的影响。首次研究了尿液和肾小管上皮细胞系HK-2表达的HNL/NGAL的分子形式,结果发现HNL/NGAL的存在形式呈现多样性;逆境、细胞因子(IL-1β和TNF-α)和内毒素(LPS)能诱导HK-2细胞表达HNL/NGAL,首次通过细胞模型在基因和蛋白质水平证明了心脏外科手术后尿中积累的HNL/NGAL部分来源于肾脏的表达和分泌。此外,本论文首次提出了以分子存在形式结合基于某一特定分子形式的免疫学测定方法来研究尿中HNL/NGAL的来源,这一思路还可以用于建立特异性和敏感性更高的AKI及其他疾病的HNL/NGAL免疫学诊断方法。
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