研究背景：　　 着色芽生菌病(Chromoblastomycosis，CBM)是由一组暗色真菌引起的慢性肉芽肿性皮肤病变，常累及体力劳动者，好发于易受外伤的暴露部位。主要分布于热带、亚热带地区。在中国，CBM已见于20多个省、自治区，以山东章丘和河南荥阳最为多见。着色霉属是CBM最常见的致病菌，其中裴氏着色霉(Fonsecaea pedrosoi，F.p)和F.monophora(Fonsecaea monophora，F.m)是最常见的致病菌种。CBM临床表现并无特异--性，直接镜检或组织病理发现硬壳小体是诊断CBM的金标准之一，但其阳性率往往受取材及镜检水平的影响。暗色真菌培养生长缓慢，不利于疾病的快速诊断，且培养过程中有污染的可能。CBM病程长，顽固易复发，可引起关节强直畸形、肌肉萎缩、骨质疏松等继发损害，甚至继发鳞状细胞癌，严威胁人类身心健康，为了有效实施早期诊治，探寻快速特异的诊断方法越来越受到重视。随着分子生物学的发展，PCR技术逐渐应用于疾病的诊断领域，国内外已有利用巢式PCR方法检测石蜡包埋组织中的毛霉、荚膜组织胞浆菌、马尔尼菲青霉(Penicillium marneffei，P.m)等病原菌的报道，也有应用巢式PCR检测新鲜组织中孢子丝菌的报道，PCR鉴定纯培养着色霉亦有报道。本研究拟采用巢式PCR方法检测石蜡包埋组织中的着色霉，并按文献报道方法应用巢式PCR检测孢子丝菌病、马尔尼菲青霉病(penicilliosis marneffei，PSM)组织蜡块中的致病菌，通过比较评价该诊断方法在诊断着色霉所致CBM中的应用价值。　　 目的：　　 1.从石蜡包埋组织中获取可用于PCR扩增的着色霉DNA。　　 2.评价单一PCR和巢式PCR方法检测着色霉DNA的灵敏度。　　 3.比较病理学检查与巢式PCR两种诊断方法之间的差异。　　 4.通过比较巢式PCR方法检测石蜡包埋组织中着色霉与检测P.m、孢子丝菌的差异，对该方法在诊断CBM中的应用作出评价。材料和　　 方法：　　 提取10例CBM病人及10例F.m感染免疫正常Wistar大鼠皮损石蜡包埋组织中的DNA，基于着色霉rDNA ITS区域设计特异性引物，采用巢式PCR方法进行扩增。同时提取石蜡包埋的PSM组织10例，孢子丝菌病组织10例，曲霉病、荚膜组织胞浆菌病、念珠菌病、毛霉病组织各1例作为对照。采用基于P.m、孢子丝菌的18s rDNA区域的特异性引物，分别对PSM和孢子丝菌病组织蜡块进行相应的巢式PCR扩增。以SPSS16.0软件进行统计结果的比较与分析。　　 结果：　　 1.10例CBM病人及10例F.m感染免疫正常Wistar大鼠皮损石蜡包埋组织外巢PCR扩增前者8例，后者2例可见1至数个550-900bp条带，内巢PCR扩增前者3例、后者5例出现117bp条带。　　 2.单一PCR和巢式PCR检测着色霉DNA的灵敏度分别为1.852×103fg/μl和1.852×10-2fg/μl，巢式PCR比单一PCR约敏感105倍。　　 3.10例PSM石蜡包埋组织外巢PCR均出现600bp条带，内巢PCR均出现400bp条带。10例孢子丝菌病石蜡包埋组织外巢PCR2例出现305bp条带，内巢PCR7例出现152bp条带。　　 4.组织病理与巢式PCR方法诊断CBM结果差异具有统计学意义，P=0.001。巢式PCR诊断CBM与诊断PSM比较结果有统计学差异，P值为0.002。巢式PCR诊断孢子丝菌病与诊断CBM、PSM相比，结果无统计学差异，P值分别为0.245，0.211。　　 结论：　　 1.可以从深部真菌病石蜡包埋组织中获得可扩增着色霉DNA。　　 2.巢式PCR比单一PCR检测着色霉DNA灵敏度更高。　　 3.组织病理诊断CBM优于巢式PCR方法。　　 4.巢式PCR扩增石蜡包埋组织中所提取的DNA可以快速、特异地诊断CBM，但诊断CBM的应用价值不如PSM。