γ-亚麻酸产生菌拉曼被孢霉培养基优化及发酵动力学分析

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γ-亚麻酸(Gamma Linolenic Acid,GLA)是一种人体必需的多不饱和脂肪酸,广泛地被应用于食品、医药、保健品等行业。它具有定向杀死癌细胞、缓解骨质疏松、过敏性鼻炎以及心脏病等生理活性及功效。同时,它能够控制体内的代谢途径降低胆固醇的水平。目前,市面上出现的GLA产品主要来源于植物油脂,大部分来自月见草种子,然而植物来源的GLA产品不能满足市场需要。微生物发酵拥有一系列植物来源无法比拟的优点,具有很大的发展潜力。本文以拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)HLY0902为生产菌株,以代谢调控的角度,通过外源添加其在代谢过程中重要的中间代谢物,研究这些物质对GLA的合成影响。使用单因素实验方法,确定了对拉曼被孢霉产GLA有促进作用的营养成分的最佳浓度,分别是:乙酸4 mg/L,丙酮酸6 mg/L,草酰乙酸10 mg/L,苹果酸2 mg/L,谷氨酸2mg/L,琥珀酸2 mg/L,柠檬酸8 mg/L,维生素B1 2 mg/L,维生素B2 10 mg/L,维生素PP 4 mg/L,维生素B6 6 mg/L,维生素M 8 mg/L。其次,结合实验室的前期研究,利用Plackett-Burman实验设计对GLA积累有影响的16种营养物质进行筛选,结果表明:葡萄糖、酵母膏、KH2PO4、柠檬酸为发酵过程中的显著影响因素,接着以GLA产量为响应值,通过Box-Behnken实验设计和响应面分析得到影响GLA产量的二阶数学模型,优化得到四个显著因素的最佳水平。综合得到改良培养基配方:葡萄糖96 g/L,酵母膏10 g/L;KH2PO4 5 g/L,NaNO3 3 g/L,MgSO4 1 g/L,CuSO4 0.1 mg/L,柠檬酸7 mg/L,ZnSO4 20 mg/L,MnSO4 0.5 mg/L,FeSO4 40 mg/L,维生素B1 0 mg/L,维生素B2 10 mg/L;维生素PP 4 mg/L,维生素B6 4 mg/L,维生素M 10 mg/L,乙酸8mg/L。在优化条件下,GLA产量达到1323.6 mg/L,与优化前(1050.0 mg/L)相比,提升了20.67%。最后,对拉曼被孢霉HLY0902进行摇瓶发酵动力学研究,建立了菌体生长、油脂生成以及葡萄糖消耗的动力学模型。采用非线性拟合的方法结合实验结果对模型进行拟合。结果表明,模型拟合度较高,能够较好地描述产GLA菌株拉曼被孢霉HLY0902发酵过程中的代谢变化。
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