b0，+是肠道和肾脏主要转运碱性氨基酸和胱氨酸的转运载体。它属于钠离子非依赖的异二聚体氨基酸转运载体，由b0,+AT和rBAT两个亚基组成，且两者需要一起表达才能到达浆膜上发挥氨基酸转运活性。b0，+AT由SLC7A9基因编码，此基因位于19号染色体上，并且，该蛋白对碱性氨基酸和胱氨酸有很高的亲和力，包括b0，+AT-1和其剪切体b0,+AT-2两种形式，两个序列都是编码相同的蛋白质。为研究鸡碱性氨基酸转运载体b0，+AT的cDNA结构特征，探讨该基因mRNA和蛋白的表达特点，本试验运用cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE)技术克隆得到鸡b0，+AT全序列，并对该序列进行生物信息学分析；采用荧光定量PCR方法检测鸡21日龄b0,+AT mRNA的组织特异性分布，并选用1、21、42和63日龄黄羽肉鸡十二指肠、空肠、回肠组织样品，采用荧光定量PCR方法检测鸡b0,+AT mRNA发育性表达；通过构建鸡pET-32a-b0，+AT载体，原核表达蛋白经纯化后，注射于新西兰大白兔，经三次加强免疫后，制备兔抗鸡b0，+AT多克隆抗体，并采用ELISA和Western Blot技术分析其效价和特异性；采用Western Blot技术检测兔抗鸡b0，+AT多克隆抗体在鸡肠道组织的特异性与应用。　　 研究结果如下：　　 1.利用RACE方法克隆得到一段1828bp的鸡b0，+AT基因全长cDNA序列(GenBank收录号为HQ338713)，其中包括5’非翻译区(Untranslated Region，UTR)149bp，3’非翻译区197bp，开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)1482bp。　　 2.生物信息软件分析结果表明，鸡b0，+AT基因编码的蛋白序列为493个氨基酸，该基因与人、牛、鼠和猪在核酸序列上分别有77.08％、74.04%、77.08%和74.04%的同源性；在氨基酸序列上分别有69.61%、70.18%、69.64%、70.72%同源性。推测b0，+AT有12个跨膜螺旋结构。　　 3.实时荧光定量RT-PCR检测发现：b0,+AT mRNA在21日龄黄羽肉鸡各组织器官中广泛表达，其肠道表达量最高(十二指肠＞回肠＞空肠)，肾脏和肺表达量次之，在肝脏、心、肌肉和脑也有少量的表达。　　 4.实时荧光定量RT-PCR检测鸡b0,+AT在1、21、42和63日龄黄羽肉鸡十二指肠、空肠和回肠的发育性表达模式，结果表明：b0，+AT mRNA发育性表达在十二指肠、空肠和回肠存在相似的规律；即从1d时b0,+AT表达达到较高水平后开始下降，到21d达到最低后开始上升，而42d后又下降。十二指肠和回肠均以1d和42d表达最高，显著高于其他两个阶段P＞0.05)；空肠以21d表达最低，且显著低于其他三个阶段(P＜0.05)。　　 5.构建鸡pET-32a(+)-b0，+AT载体，经原核表达蛋白并纯化后，注射于新西兰大白兔，经过三次加强免疫后获得兔抗鸡b0，+AT多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot技术检测制备的多克隆抗体效价和特异性表明，效价可达到1：204800，且特异性较好。　　 6.利用制备的兔抗鸡b0，+AT多克隆抗体作为一抗，肠道组织膜蛋白为抗原，采用Western blot验证其在肠道粘膜组织中的特异性，结果表明在50kDa处有预期的特异性条带，且无其他杂带，表明抗体特异性很好，一抗稀释比例为1:4000。