论文部分内容阅读
目的:中草药(CHM)为原发性肝癌(HCC)的临床治疗提供了有效的辅助作用,有利于肝部分切除术后患者的恢复和增强分子靶向药物的作用。本实验研究的目的是探讨中药复方肝癌1号抗肝癌细胞的作用及其分子机制。方法:在体外细胞实验中,我们通过MTT实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(1、2、4、8、12和16 mg/ml)处理正常肝细胞HL-7702和肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h后细胞的增殖情况;克隆形成实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(2、4、8和12 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞的增殖情况;流式细胞周期实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(8和12 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞的周期阻滞情况;流式细胞凋亡实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(2、4、8和12 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞的凋亡情况;划痕实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(2、4和8 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞的迁移能力;Transwell迁移和侵袭实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(2、4和8 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞的迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测不同浓度的中药复方肝癌1号(2、4、8和12 mg/ml)处理肝癌SMMC-7721细胞24h后增殖细胞核抗原(PCNA)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、PARP、Caspase-8、Caspase-3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达情况。体内裸鼠皮下荷植瘤实验检测中药复方肝癌1号能否抑制肿瘤的生长。结果:MTT实验结果表明,中药复方肝癌1号能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,并且有时间和浓度依赖性(p﹤0.05),但对正常肝细胞的抑制作用不明显(p﹥0.05)。克隆形成实验结果表明,不同浓度的中药复方肝癌1号能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,随着药物浓度的增加,所形成的细胞集落越少(p﹤0.05)。流式细胞周期结果表明,中药复方肝癌1号可以将细胞阻滞在G2/M期。流式细胞凋亡结果表明,中药复方肝癌1号可明显抑制细胞的早期凋亡和晚期凋亡(p﹤0.05)。划痕实验结果表明,中药复方肝癌1号可抑制细胞的迁移能力(p﹤0.05)。Transwell迁移和侵袭实验结果表明,中药复方肝癌1号明显抑制了细胞的迁移和侵袭能力,迁移的细胞数分别为149±12、105±19、68±9和21±4,差异有统计学意义(p﹤0.05);侵袭的细胞数分别为89±9、61±4、35±9和17±5,差异有统计学意义(p﹤0.01)。蛋白免疫印迹实验结果发现,随着中药复方肝癌1号浓度的增加,可以上调Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达;下调PCNA、TRAF2、Full-length Caspase-8、Full-length Caspase-3、Full-length PARP、MMP-2和MMP-9蛋白的表达。裸鼠体内荷瘤实验结果表明,中药复方肝癌1号能够明显抑制裸鼠体内肿瘤的增长。结论:中药复方肝癌1号能够抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡,降低肝癌细胞的转移和侵袭能力,同时也抑制了裸鼠体内肿瘤的生长。