【摘 要】
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目的:本实验探讨了在宫颈癌细胞系SiHa细胞中去除细胞膜脂筏的胆固醇是否可以影响EGF-R的活性及是否可非配体结合性激活EGF-R,进而影响MMP-1和MMP-2的基因表达。
方法:在0-
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目的:本实验探讨了在宫颈癌细胞系SiHa细胞中去除细胞膜脂筏的胆固醇是否可以影响EGF-R的活性及是否可非配体结合性激活EGF-R,进而影响MMP-1和MMP-2的基因表达。
方法:在0-4℃条件下,收集血浆饥饿的宫颈癌SiHa细胞,超高速离心后,采用Western blot技术检测细胞膜脂筏上EGF-R的表达。在明确了细胞膜脂筏上含有EGF-R之后,取血浆饥饿24h之后的SiHa细胞,将细胞分为三组,第一组为对照组,未给予任何刺激;第二组为单纯β-甲基环糊精(Methyl-β-cyclodextrin)刺激组;第三组为在EGF刺激的基础上再加β-甲基环糊精刺激组,用RT-PCR检测给予不同刺激后SiHa细胞中MMP-1和MMP-2的mRNA水平的表达。
结果:确定EGF-R定位于SiHa细胞膜脂筏上。使用β-甲基环糊精单独处理细胞去除细胞膜脂筏的胆固醇后,在mRNA水平上轻度上调MMP-1的表达,抑制MMP-2的表达(P<0.05),而在EGF作用于细胞的基础上用β-甲基环糊精去除细胞膜脂筏的胆固醇后,在mRNA水平上显著上调MMP-1的表达,抑制MMP-2的表达(P<0.01),具有统计学意义。
结论:去除细胞膜脂筏的胆固醇可以引起非配体结合性激活EGF-R,进而在mRNA的水平上轻度上调MMP-1的表达,抑制MMP-2的表达,而在配体性激活EGF-R后,去除细胞膜脂筏的胆固醇,可在mRNA水平上显著诱导MMP-1的表达增加,抑制MMP-2的表达。对MMPs的深入研究,有助于人们采取有效的措施防治宫颈癌浸润转移,提高宫颈癌病人治疗效果。
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