论文部分内容阅读
[目的]血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在参与包括肿瘤血管在内的病理性血管形成中的作用已被广泛研究和认识。近年来,随着研究的深入,VEGFR-1在肿瘤侵袭进展中的非促血管形成功能越来越受到重视。结肠癌、胰腺癌、乳腺癌的体内外研究中显示,肿瘤组织及体外细胞系均存在有功能性VEGFR-1,其激活后可以通过诱导肿瘤细胞发生上皮细胞向间质细胞转化(EMT)以及促进MMPs的分泌及活性功能增强两方面来增加肿瘤细胞的侵袭转移能力。原发性肝细胞癌(HCC)是VEGF高表达的富血供、高侵袭性实体肿瘤。国内外对HCC中VEGFR-1的表达情况及其功能和机制尚没有系统研究。本研究检测了国内几种常见肝癌细胞系VEGFR-1的表达情况,并在SMMC-7721肝癌细胞系上,用VEGF-B167特异性激活VEGFR-1,检测肿瘤细胞核转录因子snail的表达变化及MMP-9表达和活性功能变化。同时检测不同侵袭能力肝癌细胞系：MHCC-97H、SMMC-7721、HepG2及正常胎肝细胞系LO2中Snail的表达水平,结合文献,对肝癌细胞系中VEGFR-1的功能和机制做初步研究探讨,为寻找防治肝癌侵袭转移的靶点提供新的理论依据。[方法]培养细胞系：LO2、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H, Western blot(WB)方法检测VEGFR-1、snail蛋白的表达,凝胶成像系统扫描各条带灰度值对各组进行半定量分析比较；SMMC-7721细胞系换无胎牛血清1640培养基,饥饿过夜,次日加入VEGF-B167 (50ng/ml)处理,同时设置非特异性IgG对照组和完全空白对照,WB法检测各种处理组snail蛋白的表达和VEGF-B167刺激后不同时间点(0h、8h、24h、28h、32h) snail的表达水平变化；用明胶酶谱法检测VEGF-B167刺激SMMC-7721细胞系培养上清中MMP-9活性功能的表达。进行统计分析。[结果]1、四种细胞系中均有VEGFR-1的存在,半定量灰度分析比较结果显示：MHCC-97H表达最高,SMMC-7721次之,而正常胎肝细胞系LO2也有较低的表达。2、三种肝癌细胞系中均有Snail蛋白的表达,半定量灰度分析结果显示；MHCC-97H的表达最高,SMMC-7721次之,HepG2表达较低,正常胎肝细胞LO2未见表达。3、VEGF-B167激活SMMC-7721肝癌细胞系VEGFR-1后,Snail蛋白表达逐渐增加,并在28h点达到最高,32h点下降。实验组非特异性IgG对照组4、VEGF-B167激活SMMC-7721细胞系VEGFR-1,28h点与非特异性IgG组、完全空白对照组相比,实验组Snail表达增高。5、明胶酶谱检测VEGF-B167激活SMMC-7721细胞系VEGFR-1后,28h点与非特异性IgG组、完全空白对照组相比实验组MMP-9的活性功能增强,未有明显的MMP-2 (68KD)位置负染条带的显示。6、WB检测VEGF-B167激活SMMC-7721细胞系VEGFR-1后,不同时间点MMP-9表达水平的变化。24h点出现条带,随着时间的推移,MMP-9的表达有所增高,48h条带消失。[结论]VEGFR-1表达在肝癌细胞系,其激活后引起以MMP-9表达增高和活性功能增强为表现的肝癌细胞侵袭能力的增强,而Snail基因参与介导了此过程。