内生枯草芽孢杆菌TL2抗菌蛋白的分离及特性研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:lemayn
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内生枯草芽孢杆菌TL2是从茶叶上分离筛选的对茶树轮斑病防病效果好的菌株。本研究通过利用双向电泳等蛋白质组学技术对TL2菌株的分泌蛋白进行分离纯化,并利用肽质量指纹图谱结合MALDI-TOF-TOF-MS技术对蛋白加以鉴定等。结果表明:外分泌蛋白的主要活性成分可通过30%~70%(m/v)的硫酸铵沉淀下来,而且主效抗菌蛋白包含在50%~70%(m/v)硫酸铵盐析的蛋白样品中,其分泌量还可以被茶轮斑病菌的代谢物所诱导。同时,试验表明,菌株TL2外分泌的抗菌蛋白,可以抑制茶轮斑病菌菌丝生长、分生孢子的形成和萌发,也可以使其致死,从而限制病菌的侵入和扩展,降低病害的发生程度。研究选取清晰、有明显差异的15个蛋白质斑点进行PMF结合MALDI-TOF-TOF-MS分析,结果发现:有10个蛋白点鉴定成功,其中有一种是新的胞外中性蛋白酶(Extracellular neutral protease),其对尖孢镰刀菌和立枯丝核菌等多种植物病原真菌有很好的抑菌作用。另外发现还有一种枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin protease),其是一种丝氨酸蛋白酶,它是许多生防菌致死其靶标的主要物质。如可降解木霉菌(Trichoderma spp.)、绿僵菌(Metarhizium spp.)、食线虫菌(Arthrobotrys oligospora,Clonostachys rosea)等的细胞壁或体壁。研究还表明:菌株TL2分泌的蛋白抗菌活性强、种类多。蛋白BSPT-P2可能是菌株TL2抑制茶轮斑病菌的一种主效蛋白,它可以通过病菌的代谢物来加强诱导。BSPT-P2大小为32KDa,抗菌活性高,耐热稳定,耐紫外照射,在pH6.0~9.0之间稳定,被胰蛋白酶完全水解。
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