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目的：探究lncRNAGAS5诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的分子调控机制，为今后研发针对肝癌的新型靶向抗癌药物提供实验依据。
材料和方法：
构建lncRNAGAS5过表达慢病毒载体，将其转染人肝癌HepG2细胞，筛选稳转细胞株，分为对照组（Control，转染空病毒-Lv-NC）及实验组（lncRNAGAS5，转染含有GAS5基因的慢病毒-Lv-GAS5），按下列方式进行实验：
1.qRT-PCR检测GAS5转染后在HepG2细胞中的mRNA表达水平。
2.凋亡检测试剂盒检测转染Lv-GAS5后的HepG2细胞凋亡率。
3.CCK8法检测过表达GAS5的HepG2细胞增殖能力。
4.划痕实验检测贴壁生长HepG2细胞稳转Lv-GAS5后的迁移能力，Westernblotting检测E-cadherin表达的变化。
5.流式细胞仪（FCM）检测稳转Lv-GAS5后HepG2细胞的细胞周期变化，Westernblotting检测相关周期蛋白表达的变化。
6.Westernblotting检测过表达GAS5后内质网应激非蛋白折叠反应GRP78、PERK、IRE以及凋亡通路相关基因CHOP、Bcl-2、Bax、caspase9、caspase3等的蛋白表达。
7.构建短发夹RNA干扰CHOP表达的质粒，瞬时转染过表达GAS5的HepG2细胞，凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率，Westernblotting检测相关蛋白的表达情况。
结果：
1.在肝癌HepG2细胞中稳转Lv-GAS5及Lv-NC，qRT-PCR结果分析表明Lv-GAS5实验组中GAS5mRNA表达水平明显升高（p<0.001）。
2.流式细胞术结果显示HepG2细胞在过表达GAS5后凋亡率明显增加（p<0.01）。
3.CCK8实验结果证实，过表达GAS5后HepG2的增殖能力明显下降（p<0.05）。
4.细胞划痕实验结果显示在过表达GAS548h后HepG2细胞的迁移能力受到抑制（p<0.05）；Westernblotting证实稳转Lv-GAS5后HepG2细胞中E-cadherin表达水平上升（p<0.01）。
5.FCM检测结果证实外源性过表达GAS5后HepG2细胞周期阻滞于G2/M期（p<0.05）；Westernblotting证实过表达GAS5后HepG2细胞中周期相关蛋白p-CDC2、CyclinB表达水平下降（p<0.01）。
6.Westernblotting结果证实：外源性过表达GAS5可减少GRP78、XRCC6(Ku70)的蛋白表达，显著增加HepG2细胞中内质网应激非蛋白折叠反应通路相关基因PERK、IRE1的蛋白表达水平，ERS凋亡通路相关基因DDIT3(CHOP)、Bax、cleaved-caspase9、cleaved-caspase3的蛋白表达水平明显升高，Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3的蛋白表达水平显著下降（p<0.01），表明外源性GAS5活化了内质网应激通路及线粒体凋亡通路。
7.制备CHOP干扰质粒（sh-CHOP），在已稳转GAS5的HepG2细胞中通过Lipo3000导入sh-CHOP，FCM结果显示干扰CHOP后细胞凋亡率明显减少（p<0.01）。细胞Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3的蛋白表达水平显著上升，cleaved-caspase9、cleaved-caspase3的蛋白表达水平显著下降（p<0.05），表明抑制CHOP阻滞了内质网应激凋亡通路的活化，可降低GAS5所致肝癌细胞的凋亡率。
结论：
1.外源性GAS5通过活化内质网应激GRP78/CHOP及Ku70/Bax线粒体信号通路，上调caspase-3，促进肝癌HepG2细胞凋亡。
2.外源性GAS5通过阻滞细胞周期于G2/M期，而抑制肝癌HepG2细胞增殖。
3.外源性GAS5通过上调E-cadherin的表达抑制上皮间充质转换，可能抑制肝癌HepG2细胞迁移。
材料和方法：
构建lncRNAGAS5过表达慢病毒载体，将其转染人肝癌HepG2细胞，筛选稳转细胞株，分为对照组（Control，转染空病毒-Lv-NC）及实验组（lncRNAGAS5，转染含有GAS5基因的慢病毒-Lv-GAS5），按下列方式进行实验：
1.qRT-PCR检测GAS5转染后在HepG2细胞中的mRNA表达水平。
2.凋亡检测试剂盒检测转染Lv-GAS5后的HepG2细胞凋亡率。
3.CCK8法检测过表达GAS5的HepG2细胞增殖能力。
4.划痕实验检测贴壁生长HepG2细胞稳转Lv-GAS5后的迁移能力，Westernblotting检测E-cadherin表达的变化。
5.流式细胞仪（FCM）检测稳转Lv-GAS5后HepG2细胞的细胞周期变化，Westernblotting检测相关周期蛋白表达的变化。
6.Westernblotting检测过表达GAS5后内质网应激非蛋白折叠反应GRP78、PERK、IRE以及凋亡通路相关基因CHOP、Bcl-2、Bax、caspase9、caspase3等的蛋白表达。
7.构建短发夹RNA干扰CHOP表达的质粒，瞬时转染过表达GAS5的HepG2细胞，凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率，Westernblotting检测相关蛋白的表达情况。
结果：
1.在肝癌HepG2细胞中稳转Lv-GAS5及Lv-NC，qRT-PCR结果分析表明Lv-GAS5实验组中GAS5mRNA表达水平明显升高（p<0.001）。
2.流式细胞术结果显示HepG2细胞在过表达GAS5后凋亡率明显增加（p<0.01）。
3.CCK8实验结果证实，过表达GAS5后HepG2的增殖能力明显下降（p<0.05）。
4.细胞划痕实验结果显示在过表达GAS548h后HepG2细胞的迁移能力受到抑制（p<0.05）；Westernblotting证实稳转Lv-GAS5后HepG2细胞中E-cadherin表达水平上升（p<0.01）。
5.FCM检测结果证实外源性过表达GAS5后HepG2细胞周期阻滞于G2/M期（p<0.05）；Westernblotting证实过表达GAS5后HepG2细胞中周期相关蛋白p-CDC2、CyclinB表达水平下降（p<0.01）。
6.Westernblotting结果证实：外源性过表达GAS5可减少GRP78、XRCC6(Ku70)的蛋白表达，显著增加HepG2细胞中内质网应激非蛋白折叠反应通路相关基因PERK、IRE1的蛋白表达水平，ERS凋亡通路相关基因DDIT3(CHOP)、Bax、cleaved-caspase9、cleaved-caspase3的蛋白表达水平明显升高，Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3的蛋白表达水平显著下降（p<0.01），表明外源性GAS5活化了内质网应激通路及线粒体凋亡通路。
7.制备CHOP干扰质粒（sh-CHOP），在已稳转GAS5的HepG2细胞中通过Lipo3000导入sh-CHOP，FCM结果显示干扰CHOP后细胞凋亡率明显减少（p<0.01）。细胞Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3的蛋白表达水平显著上升，cleaved-caspase9、cleaved-caspase3的蛋白表达水平显著下降（p<0.05），表明抑制CHOP阻滞了内质网应激凋亡通路的活化，可降低GAS5所致肝癌细胞的凋亡率。
结论：
1.外源性GAS5通过活化内质网应激GRP78/CHOP及Ku70/Bax线粒体信号通路，上调caspase-3，促进肝癌HepG2细胞凋亡。
2.外源性GAS5通过阻滞细胞周期于G2/M期，而抑制肝癌HepG2细胞增殖。
3.外源性GAS5通过上调E-cadherin的表达抑制上皮间充质转换，可能抑制肝癌HepG2细胞迁移。