论文部分内容阅读
本文以变异链球菌CICC10387(Streptococcus mutans CICC10387)、唾液链球菌CGMCC1.2498(Streptococcus salivarius CGMCC1.2498)、金黄色葡萄球菌CGMCC1.72 (Staphylococcus aureus CGMCC1.72)、表皮葡萄球菌CBL-R(Staphylococcus epidermidis CBL-R)、表皮葡萄球菌TS5(Staphylococcus epidermidis TS5)、白色念珠菌(Candida albicans)、变形杆菌(Bacillus proteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)为供试菌,研究了海南腰果梨提取物的抑菌活性；腰果梨抑菌物质的最佳提取方法；原料干燥方法对抑菌效果的影响；并对提取物中抑菌成分进行了分离和鉴定。结果如下：水浴回流提取腰果梨抑菌活性成分,以抑菌圈直径为指标,从乙酸乙酯、70%丙酮(V/V)、70%甲醇(V/V)、70%乙醇(V/V)、正丁醇、水不同极性溶剂中选择最佳提取剂。试验表明：腰果梨70%乙醇提取物抑菌效果最好,且对金黄色葡萄球菌抑制作用最强,白色念珠菌次之。为了探索不同品种腰果梨(黄色、红色)中抑菌活性物质提取的最佳工艺参数,选择金黄色葡萄球菌、白色念珠菌为指示菌,抑菌圈直径之和为响应值,在单因素试验基础上,以溶剂浓度(体积分数)、提取温度、料液比、提取时间为试验因素,采用中心组合设计进行优化。结果表明：提取腰果梨中抑菌活性成分的最佳工艺参数为,①黄色腰果梨：乙醇体积分数为70%,提取温度85℃,料液比1：13.9,提取时间2.65h；②红色腰果梨：乙醇体积分数为70%,提取温度85℃,料液比1：14.5,提取时间2.44h。验证值为25.2mm与26.2mm,与预测值24.82mm和25.21mm相差不大(δ<5%)。因此,该方法对腰果梨提取条件的优化是可行的,具有实际应用价值。为了研究腰果梨的干燥方法对抑菌效果的影响,本试验选择了60℃热风干燥和真空冻干(冷阱-60℃,气压0.42mbar)两种不同的处理方法。按腰果梨不同品种与处理方法分别进行回流提取、浓缩,并对8株供试菌进行抑菌活性试验。结果表明：对表皮葡萄球菌CBL-R的抑菌效果,腰果梨不同品种与干燥方法之间不存在显著性差异(a=0.05)；对唾液链球菌、表皮葡萄球菌TS5、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、变异链球菌的抑制作用,热风干燥处理优于真空冻冷干燥,均存在显著性差异(a=0.05)；对白色念珠菌和大肠杆菌的抑制作用,真空冻干方法明显强于热风干燥,具有显著差异(a=0.05)。从经济成本综合考虑,可以选择对腰果梨进行60℃热风干燥方法处理。通过对提取物进行萃取与硅胶柱色谱分离试验,结果表明：各萃取物中只有乙酸乙酯萃取物(50mg/mL)对金黄色葡萄球菌有抑菌效果,说明抑菌成分主要集中在该萃取相中。将乙酸乙酯萃取物经过硅胶柱层析分离后,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为8.6+0.2mm,较过柱前提高了7.5%。根据物质所具有的特征性反应,定性鉴定结果为：腰果梨提取物中含有的黄酮、酚、蒽醌及其甙类物质。经GC-MS分析得知,在所有检出的化合物中,糠醛衍生物(5-羟甲基-2-糠醛)含量最高,相对峰面积达60.88%,结合相关资料推断该物质是腰果梨提取物中的抑菌功能性成分。