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目的:研究清脑益元汤对大鼠脑缺血损伤后BDNF、MKK7表达的影响,探讨清脑益元汤保护脑缺血损伤的可能作用机制。方法:将192只雄性SD大鼠,体重250±30g,按随机数字表法分为4组:空白组(n=12只)、假手术组(n=60只)、模型组(n=60只)、清脑益元汤组(n=60只)。假手术组、模型组及清脑益元组按缺血损伤后1d、3d、7d、14d、28d五个取材时间点分为5个亚组(n=12只)。并分别作如下处理:空白组正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;假手术组仅插线0.8cm,术后正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;模型组行MCAO术,制成大鼠急性脑缺血损伤模型,术后灌胃等体积蒸馏水至各取材时间点;清脑益元汤组灌胃等体积清脑益元汤7d后行MCAO术,制成大鼠急性脑缺血损伤模型,术后灌胃等体积清脑益元汤至各取材时间点。模型大鼠参考Longa的5分制法对大鼠进行神经功能缺损评分,并按各时间点进行标本采集。取材后,免疫组织化学法检测大鼠缺血侧皮质区BDNF免疫阳性细胞数;RT-qPCR检测大鼠缺血侧皮质区BDNFmRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blotting)法检测大鼠脑缺血侧皮质区MKK7蛋白的表达水平,并用SPSS24.0统计软件包进行数据处理。结果:(1)神经功能缺损评分:空白组及假手术组大鼠均未见神经功能缺损症状,模型组及清脑益元组均有不同程度的神经功能缺损表现,相同时间点的模型组相比,清脑益元组大鼠神经功能缺损评分均有不同程度的改善(P<0.05)。(2)免疫组化法检测结果:空白组、假手术组可见少量BDNF免疫阳性细胞的表达,两组在各时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、清脑益元组在缺血侧BDNF免疫阳性细胞明显增多,在缺血损伤3d达到高峰后缓慢减少;与相同时间点模型组相比,清脑益元组BDNF免疫阳性细胞表达明显增多(P<0.05);(3)RT-qPCR法检测结果:在各相同时间点,假手术组与空白组相比,大鼠脑组织BDNFmRNA的表达量无差异(P>0.05);与相同时间点假手术组相比,模型组、清脑益元汤组大鼠脑组织缺血侧皮质区BDNFmRNA表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与相同时间点模型组相比,清脑益元汤组大鼠脑组织缺血侧皮质区BDNFmRNA表达量升高(P<0.05);(4)蛋白质印迹法检测结果:在相同时间点,与空白组相比,假手术组MKK7蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。与相同时间点假手术组相比,模型组与清脑益元汤组MKK7蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与相同时间点模型组相比,清脑益元汤组MKK7蛋白均有所降低(P<0.05)。结论:清脑益元汤可改善脑缺血损伤神经功能,其作用机制可能通过上调脑缺血损伤后BDNF、降低MKK7的表达而发挥脑保护作用。