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Himp1是一种抗应激基因，蛋白质高度保守，在低血糖和缺氧等引起的应激情况下大量增加。过表达实验证明Himp1能使组织细胞抵抗因多种刺激物引起的程序性死亡(Apoptosis)，抵抗应激反应并延长生存时间。但是在Himp1表达水平不足的情况下，组织细胞有何表现尚未见报道。本实验拟用两种不同的RNA干扰方法降低Himp1的表达量，并研究由此产生的靶细胞的反应。为了验证Himp1基因过表达效应，我们利用RT-PCR方法进行了小鼠Himp1基因的克隆，并构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-Himp1。转染Hela（宫颈癌）和293Rb（人胚肾）细胞后，荧光定量PCR检测Himp1基因mRNA的表达水平。结果显示，转染细胞的Himp1表达水平极显著升高（p<0.01）。采用MTT法检测Himp1基因与细胞增殖的关系，结果显示，转染Himp1基因的细胞增殖率高于对照组；采用DNALadder法检测在10%乙醇刺激下，Himp1基因与细胞凋亡的关系，结果显示转染Himp1基因的细胞凋亡程度低于对照组。证明，Himp1基因的过表达不但能抵抗细胞凋亡，而且有促进细胞增殖的作用。为了研究Himp1不足对细胞的影响，本研究分别采用两种方法进行了Himp1基因的干扰试验：dsRNA法，另一种是siRNA法。dsRNA法：采用体外转录合成Himp1dsRNA、对照绿色荧光蛋白EGFP dsRNA。pEGFP-N1与其EGFP dsRNA瞬时共转染Hela和293Rb细胞，利用荧光显微镜，实时荧光定量PCR检测EGFP基因表达水平的干扰效果。结果显示：Hela和293Rb细胞共转pEGFP-N1+dsRNA细胞孔比单转pEGFP-N1细胞孔荧光明显减少，降低大约为50%；实时荧光定量PCR分析EGFP基因mRNA表达水平。结果分析为：EGFP dsRNA抑制EGFP基因的表达（p<0.01）。Himp1基因与dsRNA瞬时共转染Hela和293Rb细胞，利用实时荧光定量PCR检测Himp1基因mRNA表达水平的干扰效果。结果显示：Himp1dsRNA抑制Himp1基因的表达（p<0.05）。dsRNA干扰实验小结：当单用pEGFP-N1质粒转染Hela和293细胞后，两种细胞都检测到绿色荧光，当pEGFP-N1质粒与体外转录得到的EGFP dsRNA共转染后，绿色荧光减弱或者消失。我们又用鼠Himp1真核表达载体与体外转录得到的Himp1dsRNA共转染后，用Q-PCR检测的Himp1的mRNA水平，比单用Himp1转染的细胞减少50%，干扰后细胞凋亡增加。为了进一步研究大动物的Himp1基因，我们通过电子克隆，克隆了猪的Himp1基因，并构建了真核表达重组质粒猪pcDNA3.1(+)-Himp1。利用化学合成的方法，合成了siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4、non-sliencing共5对siRNA，分别转染Hela细胞，利用实时荧光定量PCR检测Himp1基因mRNA表达水平的干扰效果。分析结果为：转染siRNA1能有效抑制内源Himp1基因的表达（p<0.05），成功筛选出有效的siRNA序列，为下一步采用猪Himp1基因的特异性干扰技术，探索Himp1基因的功能奠定了基础。