【摘 要】
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应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBlueBac25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),克隆到表达载体pQE32中,转化JM109菌株,诱导表达出N端含6个组氨酸
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应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBlueBac25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),克隆到表达载体pQE32中,转化JM109菌株,诱导表达出N端含6个组氨酸的NS5A蛋白(58kD),用Ni-NTA-Superflow亲和层析柱纯化NS5A蛋白,以提纯的NS5A蛋白为抗原用间接ELISA法检测HCV抗体诊断国家参考品及临床血清中的HCV抗体.结果显示,在92份临床血清中HCV检出阳性率为75﹪;HCV抗体诊断国家参考品阳性标准血清的阳性检出率为82.5﹪,阴性符合率为100﹪;与NS3蛋白检测的灵敏度和特异性相当接近.证实NS5A蛋白在HCV血清中检测上有相当大的应用价值.
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