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两性霉素B(Amphotericin B,AmB)是一种多烯类抗生素,在1995年从链霉菌的培养液中分离而得来的。AmB是可运用于全身性真菌感染的广谱抗真菌药,它一直是治疗真菌感染的黄金标准。它的高效抗真菌机制是因为与真菌细胞膜内的甾醇结合,破坏细胞膜的完整性。细胞膜通透的破坏使真菌细胞内重要物质外漏,导致真菌细胞死亡。可是,由于AmB的低水溶性限制了其应用。因此,关键问题是解决AmB的应用,提高它的水溶性、口服吸收和体内生物利用度。纳米粒载药系统是近些年兴起的一种新型制剂技术,是21世纪战略技术的制高点。它不仅能够增加难溶性药物的溶解度,提高药物在体内的生物利用度,而且药物制成纳米粒后,还具有靶向、缓释、增强疗效以及减少毒副作用等特点。本课题主要是应用纳米技术提高AmB的水溶性、生物利用度以及口服吸收,使AmB成为更加有效的抗真菌口服药物。本课题主要是解决口服AmB的水溶性问题,采用液体反溶剂重结晶技术和冷冻干燥法制备AmB纳米制剂,从而提高AmB的水溶性。通过单因素试验对液体反溶剂法进行优化,确定了表面活性剂及浓度、搅拌时间、沉积温度、搅拌强度、药物浓度和反溶剂-溶剂的体积比对AmB纳米粒平均粒径的影响程度。然后,对最优条件下获得的AmB纳米粒进行理化性质检测和生物功能检测,主要包括扫描电子显微镜检测(SEM),质谱检测(MS),傅里叶红外光谱检测(FTIR),X-射线衍射检测(XRD),差示扫描量热检测(DSC),热重分析检测(TG),溶剂残留检测,纯度检测,溶出度实验和生物利用度实验。1.通过单因素试验对液体反溶剂法进行优化,AmB纳米粒最优制备条件如下:0.15%吐温-80,搅拌时间为30 min,沉积温度为12 ℃C,搅拌强度为2000 r/min,药物浓度为20mg/mL,反溶剂-溶剂的体积比为13/1。实验结果表明:随着搅拌强度和沉积时间的增加,AmB纳米粒的平均粒径逐渐减小,但是当沉积时间超过30 min后,粒径不再减小,基本保持不变;随之吐温-80浓度和药物浓度的增加,AmB纳米粒的粒径逐渐增大;随着沉积温度和反溶剂-溶剂的体积比的增加,AmB纳米粒的粒径呈现先减小后增加的趋势。最优条件下制备得到的AmB纳米粒的平均粒径为135.1 nm。2.理化性质检测:扫描电子显微镜检测结果说明制备后AmB纳米粒呈圆球状。AmB纳米粒与原药相比粒径明显减小,形状也更加规则,SEM结果暗示着AmB纳米粒会有更高的溶解度。FTIR和MS的检测结果表明:通过液体反溶剂制备后得到AmB纳米粒化学结构没有发生改变。XRD和DSC的检测结果表明:通过液体反溶剂制备的AmB纳米粒结构从晶体转变成为非晶体。溶剂残留结构表明:AmB纳米粒中DMSO的残留量为0.24%,低于人用药物注册技术要求国际协调会对三类溶剂的要求。溶解度和溶出度结果表明:重结晶后的AmB纳米粒的溶出速率是AmB原粉的2.1倍,平衡溶解度是AmB原粉的13倍。如上的结果都证明了,AmB纳米粒有提高其口服生物利用度的潜力。3.对大鼠进行生物利用度研究,采用高效液相色谱法检测大鼠血浆中AmB的含量。结果表明,AmB原料药口服在动物体内几乎不吸收,经过纳米化后的AmB粉体在体内的吸收明显增加,相对生物利用度是原料药的4.95倍。通过以上实验结果表明,本实验所制备的AmB纳米粒粒径分布均匀,形状规则呈球形,并且其理化性质稳定。AmB的水溶性得到了很大改善,同时生物利用度也得到了很大的提高。