TNF-α对成牙骨质细胞增殖、凋亡、RANKL/OPG mRNA表达影响的实验研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kc1223
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目的:本实验通过研究不同浓度TNF-α对成牙骨质细胞增殖、凋亡、RANKL/OPG mRNA表达的影响,为探讨TNF-α在牙根吸收中的生物学机制提供实验依据。方法:将体外培养的成牙骨质细胞株OCCM-30分为6组:实验组5组,对照组1组。实验组分别加入浓度为5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml TNF-α的培养液,对照组加入不含TNF-α的培养液。1、采用MTT法检测TNF-α作用24h、48h、72h后OCCM-30细胞增殖变化;2、采用流式细胞术检测TNF-α作用48h后OCCM-30细胞凋亡变化;3、采用RT-PCR检测TNF-α作用24h后OCCM-30 RANKL/OPG mRNA的表达。实验数据导入SPSS 19.0软件进行统计分析与处理。结果:1、MTT法结果显示:不同浓度的TNF-α作用24h时,5ng/ml组OCCM-30细胞吸光度值比对照组增高,25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml组的吸光度值比对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。TNF-α作用48h和72h时,各实验组细胞的吸光度值与对照组相比逐渐降低,差异有明显统计学意义(P<0.01)。2、流式细胞术结果显示:不同浓度的TNF-α作用48h时,与对照组相比,实验组OCCM-30的晚期凋亡率随着TNF-α浓度的上升而逐渐增高,各组间比较差异具有明显统计学意义(P<0.01)。3、RT-PCR结果显示:TNF-α作用24h时,与对照组相比,5ng/ml组OCCM-30的RANKL表达减弱,50ng/ml和100ng/ml组RANKL表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。5ng/ml、10ng/ml的TNF-α对OPG mRNA的表达和RANKL/OPG的比值无明显影响。25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的TNF-α能够抑制OPG mRNA的表达,并显著上调RANKL/OPG的比值,以100ng/ml TNF-α作用最为明显,差异具有明显统计学意义(P<0.01)。结论:1、TNF-α对成牙骨质细胞的增殖具有双向调节作用,低浓度短时间促进细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖,且抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性。2、TNF-α能够诱导成牙骨质细胞的凋亡,且诱导作用呈浓度依赖性。3、高浓度的TNF-α能够促进成牙骨质细胞RANKL的表达,抑制OPG的表达,升高RANKL/OPG的比值,刺激破骨细胞的分化与活化,间接参与牙根吸收。
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