胃癌是中国癌症发病率和致死率均排在前三位的恶性肿瘤,但胃癌精准医疗发展中缺少有效的标志物和治疗靶点。免疫疗法被认为是最有前景的抗癌方案,主要有免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、细胞治疗及癌症疫苗等。然而,单一的免疫疗法具有一定的局限性,将各种免疫疗法有机地联合起来进行抗癌成为了新趋势。当前研究表明利用双特异性抗体和溶瘤病毒联合抗癌可发挥协同作用,增强治疗有效性。单纯疱疹Ⅰ型病毒（HSV-1）,一种安全性极高的溶瘤病毒,具有作为基因治疗载体的独特优势,HSV-1病毒表达双特异性抗体是一种有前景的抗癌策略。目的通过生物信息筛选胃癌潜在的治疗靶点。基于课题组前期研究成果,本研究利用CRISPR/Cas9技术对HSV-1病毒进行基因编辑,以提高HSV-1病毒对肿瘤细胞的靶向性和减低其毒副作用,为后期构建用靶向胃癌的双特异性抗体武装的溶瘤病毒奠定基础,对于胃癌治疗的新策略提供实验依据和有益参考。方法（1）使用GEPIA、TIMER和Kaplan Meier plotter等在线网站分析预测胃癌的潜在治疗靶点,并通过q PCR实验验证其表达。（2）扩增分离鉴定中国人的HSV-1毒株,对扩增后的病毒进行滴度实验。（3）基于课题组前期实验成果（g RNA和同源重组质粒）利用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑,观察荧光表达情况对转染效率进行对比以筛选转染效率最高的转染细胞和转染试剂。（4）用无限稀释法挑选CRISPR/Cas9相关质粒共转染后的单克隆细胞,并通过荧光观察和q PCR实验验证转染效率和筛选重组病毒。结果1.生物信息筛选发现CD276、GBA、MFN2和Ep CAM为胃癌潜在的治疗靶点。2.PCR和q PCR测定人端粒酶逆转录酶（h TERT）基因在293T、Vero、HRT-18和胃癌BGC823细胞中的表达情况,结果显示h TERT在293T细胞中含量最高。3.比较不同转染试剂和转染细胞实验结果显示:使用转染试剂PEI和293T细胞可以实现较高的转染效率。4.使用无限稀释法,成功挑选了同时表达红色荧光（RFP）和绿色荧光（GFP）的单克隆293T细胞。结论本研究筛选鉴定了CD276和Ep CAM是胃癌潜在的免疫治疗靶点,优化了HSV-1病毒改造转染体系和单克隆细胞挑选方法,为后续构建用靶向胃癌的双特异性抗体武装的HSV-1溶瘤病毒提供实验依据。