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目的:结肠癌是一种发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤,是全球常见的恶性肿瘤之一。近年来结肠癌发病率逐年增加,已经成为威胁人类健康的最大敌人之一。根据最新的统计数据显示,结肠癌的发病率和死亡率均排在恶性肿瘤中前三位。尽管结肠癌患者通过手术、放疗、化疗以及靶向治疗等方式清除局部病灶,然而多数患者的复发率较高,晚期结肠癌患者预后很差。而目前关于结肠癌进展和转移的分子机制研究尚不完善,因此针对结肠癌进展机制的深入研究,寻找新的治疗靶点对于结肠癌的临床治疗及患者预后均具有重要的价值。RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RNA-binding motif single stranded intervacting protein 3,RBMS3）是一种RNA结合蛋白,位于人类3号染色体p23-p24区域,在癌症中经常发现该位置缺失或突变,研究表明RBMS3在许多肿瘤中充当肿瘤抑制基因,其表达下调与患者的不良预后相关。尽管RBMS3在部分肿瘤中的作用已有相关报道,但在结肠癌中,RBMS3的具体作用及相关的分子机制尚未获得深入研究,因此阐明RBMS3在结肠癌中的作用及分子机制对于完善结肠癌进展的分子理论具有重要意义,也许能够为RBMS3作为结肠癌预防和治疗的新靶点提供理论支持和实验依据。研究方法:1.TCGA和GTEX数据库联用分析结肠癌与正常结肠组织之间差异表达的RBM家族基因,t检验分析RBM基因在结肠癌及正常结肠组织中的差异表达水平,使用方差分析检验m RNA表达与临床分期之间的关系,P＜0.05认为有统计学差异;2.在配对的结肠癌组织与正常结肠组织中,应用western blot、免疫组织化学染色和qRT-PCR实验验证RBMS3的表达水平;3.分别构建稳定过表达及敲减RBMS3的结肠癌细胞系（HCT116和HCT15）,通过western blot和qRT-PCR方法验证在结肠癌细胞系中过表达及敲减RBMS3的表达水平;4.通过MTT实验及EDU方法检测过表达及敲减RBMS3后HCT116和HCT15细胞的增殖情况;5.通过Transwell实验检测过表达及敲减RBMS3后HCT116和HCT15细胞的迁移和侵袭;6.构建裸鼠皮下荷瘤模型和尾静脉肺转移模型,在体内验证RBMS3在肿瘤生长及转移中发挥的作用;7.应用数据库分析预测RBMS3可能调控靶基因,并应用功能富集分析和相关性分析筛选预测RBMS3调控的下游靶基因-LIMS1 8.通过western blot验证过表达及敲减RBMS3后LIMS1的蛋白表达情况;9.分别构建过表达及敲减LIMS1的结肠癌细胞系（HCT116和HCT15）;10.通过western blot和qRT-PCR方法验证LIMS1过表达及敲减细胞系是否构建成功;11.通过MTT实验检测过表达及敲减LIMS1后HCT116和HCT15细胞的增殖能力;15.通过Transwell实验检测过表达及敲减LIMS1后HCT116和HCT15细胞的迁移和侵袭。结果:1.RBMS3在结肠癌组织中显著低表达。通过TCGA和GTEX数据库中的结肠癌及正常结肠组织数据,分析RBM家族基因的表达情况,发现RBMS3在结肠癌组织中表达水平显著低于正常组织,且RBMS3的表达水平与患者的临床分期具有显著相关性;同时收集配对的结肠癌及正常结肠组织样本,进一步验证RBMS3在结肠癌组织中的表达水平显著低于正常结肠组织;2.RBMS3作为抑癌基因在结肠癌细胞中发挥作用。在结肠癌细胞中过表达RBMS3后,结肠癌细胞的增殖能力明显减弱,并且癌细胞的迁移和侵袭也受到抑制;而在结肠癌细胞系中敲减RBMS3后,与对照组相比,结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭则显著增强。在体内实验中观察到同样的结果,过表达RBMS3后裸鼠皮下形成的肿瘤体积显著小于对照组。同时在肺转移裸鼠模型中,可以观察到肺内转移灶的数量明显减少;而敲减RBMS3后,与对照组相比,裸鼠皮下肿瘤的体积明显增大,肺转移灶的数量也显著增加;3.RBMS3通过调控下游靶基因LIMS1在结肠中发挥抑癌作用。应用数据库分析预测LIMS1作为RBMS3调控的下游靶基因,并通过Western Blot验证在RBMS3过表达和敲减后LIMS1的蛋白表达变化,结果显示LIMS1的蛋白表达与RBMS3表达呈正相关,即在结肠癌细胞中过表达RBMS3后,LIMS1的蛋白质表达水平也明显升高,敲减RBMS3后LIMS1的蛋白表达明显减少;4.RBMS3的靶基因LIMS1在结肠癌细胞系中发挥抑癌作用。构建稳定过表达及敲减LIMS1的结肠癌细胞系,在过表达LIMS1后,结肠癌细胞的增殖能力明显减弱,并且细胞的迁移和侵袭也受到明显抑制;而当在结肠癌细胞系中敲减LIMS1后,细胞的增殖、迁移和侵袭明显增强。结论:1.RBMS3表达水平在结肠癌肿瘤组织中明显低于正常结肠组织;2.RBMS3可以抑制结肠癌的恶性表型;3.RBMS3通过调控LIMS1的表达,发挥抑制结肠癌细胞功能的作用。