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目的：构建并鉴定Lipocalin2/绿色荧光蛋白融合载体，脂质体介导转染入人肾近曲小管上皮细胞，观察其在人肾近曲小管上皮细胞中的表达和定位情况。
方法：根据基因文库(编码BC033089)报道的Lipocalin2基因cDNA序列合成引物扩增Lipocalin2全编码区，并在Lipocalin2全编码区两端分别加上限制性内切酶：NSPV和Xho Ⅰ酶切位点。经琼脂糖凝胶电泳初步鉴定为Lipocalin2基因全编码区后，回收、纯化Lipocalin2基因。扩增真核表达质粒pReceiver-M29(其上有绿色荧光蛋eGFP标签)，用小量质粒提取试剂盒提取、纯化真核表达质粒pReceiver-M29 DNA。用NSP V和Xho Ⅰ分别酶切Lipocalin2DNA和真核表达质粒pReceiver-M29 DNA，琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收、纯化产物后，利用T4 DNA连接酶将Lipocalin2连接到真核表达质粒pReceiver-M29中。重组质粒转化大肠杆菌，挑取单个克隆，提取质粒重组质粒DNA，限制性内切酶NSP V和Xho Ⅰ酶切含有Lipocalin2基因的pReceiver-M29质粒，电泳初步鉴定是否构建重组质粒pReceiver-M29-Lipocalin2成功，进一步DNA测序鉴定是否构建重组质粒成功。体外复苏培养正常人肾近曲小管上皮细胞株(HK-2)，取对数生长期细胞0.25％胰蛋白酶消化，2×105/个接种于共聚焦dish中，待细胞长到80％左右融合时，无血清1640培养基培养24h同步化，利用脂质体(TransFast Transfection Reagent)介导，将构建成功的重组质粒pReceiver-M29-Lipocalin2及空载体pReceiver-M29瞬时转染入人肾近曲小管上皮细胞中，激光共聚焦荧光显微镜观察Lipocalin2基因在人肾近曲小管上皮细胞中的表达和定位情况。
结果：
1、融合表达载体pReceiver-M29-Lipocalin2构建情况：限制性内切酶NSP Ⅴ和Xho Ⅰ酶切重组质粒及DNA测序结果都说明所构建的重组质粒为pReceiver-M29-Lipocalin2融合表达载体。
2、Lipocalin2基因在人肾近曲小管上皮细胞中定位情况：瞬时转染人肾近曲小管上皮细胞后激光共聚焦荧光显微镜观察，pReceiver-M29转染的细胞和pReceiver-M29-Lipocalin2转染的细胞荧光布局不同：pReceiver-M29空载体转染的细胞荧光均匀分布在整个细胞中，而pReceiver-M29-Lipocalin2融合表达载体转染的细胞荧光主要集中在细胞浆中。
结论：成功构建pReceiver-M29-Lipocalin2融合表达载体。瞬时转染到人肾近曲小管上皮细胞后，重组载体可在活细胞中表达而没有细胞毒性，且具有自发绿色荧光的特点，可在人肾近曲小管上皮细胞中观察Lipocalin2基因的表达和定位情况，为进一步探索Lipocalin2基因在人肾近曲小管上皮细胞转分化和/或逆转分化中的作用奠定基础。