甲苯咪唑（Mebendazole,MBZ）是一种苯并咪唑类抗寄生虫药物,在畜牧水产养殖中应用广泛,极易在动物源性食品中残留。目前检测MBZ的方法主要有仪器分析和免疫分析,仪器分析所需设备昂贵、成本高,不适合对大量样品进行快速检测。免疫分析相比于仪器分析,样本前处理简单,检测速度快且成本低,其中酶联免疫吸附法（ELISA）是应用最广泛的一种检测技术。目前研究报道检测MBZ的ELISA方法主要采用同源包被ELISA,近年来许多研究表明异源包被ELISA的灵敏度高于同源包被ELISA。因此开发基于异源包被的MBZ检测方法,有助于提高MBZ检测的准确度和分析效率,对于分析MBZ的残留具有重大意义。本研究在前期研究工作的基础上,利用与MBZ结构相似的代谢产物氨基甲苯咪唑（MBZ-NH2）作为异源半抗原,运用戊二醛法与牛血清白蛋白（BSA）偶联,构建MBZ-NH2-BSA人工抗原;纯化已获取的甲苯咪唑兔源IgG和禽源IgY抗体,优化ELISA检测条件,构建MBZ异源包被ELISA检测方法。结果如下:（1）通过使用戊二醛作为交联剂将MBZ-NH2与BSA进行偶联,获取异源包被物MBZ-NH2-BSA;运用紫外光谱扫描,同时利用前期制备的抗MBZ兔源IgG和禽源IgY,通过ELISA方法验证异源包被物MBZ-NH2-BSA是否偶联成功。实验结果表明,戊二醛法能够将MBZ-NH2与BSA偶联。另外,未经优化条件下,基于IgG的异源包被ELISA检测MBZ的最大半数抑制浓度(IC50)为4.27 ng/m L;基于IgY的异源包被ELISA检测MBZ的IC50为2.57 ng/m L。这表明在使用MBZ-NH2-BSA作为包被原时,基于IgY的ELISA方法对MBZ具有较高的灵敏度,故后续对IgY异源包被ELISA进行优化,并用于构建MBZ的ELISA检测。（2）通过棋盘法确定MBZ-NH2-BSA包被原浓度和IgY抗体稀释倍数,通过对封闭液、封闭时间和标准品稀释液（p H、Na Cl浓度以及DMSO浓度）的优化,建立基于异源包被原的MBZ ELISA快速检测方法。结果表明,MBZ-NH2-BSA包被浓度为10μg/m L,IgY稀释约1:4000,选用1%明胶封闭约1.5 h,缓冲液PBS工作条件为p H6.0,10%DMSO时,其ELISA方法的IC50为1.83 ng/m L,最低检测限为0.13 ng/m L,线性检出范围为0.34～10.54 ng/m L。对基于IgY的MBZ异源包被ELISA方法进行特异性评价,结果表明,所构建的ELISA方法除了与MBZ-NH2的交叉反应性为75.8%,与MBZ结构类似物的交叉反应性（CR）均小于1%,说明所构建的异源包被ELISA方法,对MBZ有较好的特异性,这与我们前期获取的结果一致。添加回收试验表明,猪和鸡的肌肉组织提取液在工作缓冲液10倍稀释下,可以消除样品基质的干扰,经异源包被ELISA测得MBZ在动物肌肉组织中的组内回收率为83.65%～109.75%,组内变异系数为2.24%～8.57%,组间回收率为92.51%～103.23%,组间变异系数为1.55%～6.32%。以上结果表明,基于IgY的异源包被ELISA方法,具有较高的灵敏度,满足国家标准需要,可用于动物源性食品中MBZ的残留分析,为MBZ检测试剂盒的研制和异源包被ELISA方法提供理论基础和参考依据。