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本研究完成了国家自然科学基金资助项目“中药成分的免疫增强作用和机理及新型免疫增强剂的研究”的部分工作,试验分为五部分: 1.中药成分提取和含量测定 选定黄芪多糖(APS)、当归多糖(CAPS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、黄芪黄酮(AF)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)为研究对象。其中,GS购自吉林省亚成制药厂(含量75%),其余九种中药成分自备。五种多糖用水煎醇沉法提取,硫酸蒽酮法测定含量;AF和EF用聚酰胺柱层析法提取,PF用酸碱沉淀法提取,均用芦丁法测定含量;AS用大孔吸附树脂柱层析法提取,TLC分光光度法测定含量。九种中药成分的提取率(g·Kg-1)分别为13.6、14.5、10.0、4.1、36.0、2.1、5.7、11.0、1.0,净含量(%)分别为82.48、77.28、82.94、66.38、51.41、1.39、38.37、46.92、72.88。 2.中药成分对鸡胚成纤维细胞(CEF)安全浓度的测定 将十种中药成分用细胞维持液分别稀释成一系列浓度,以两种方式(与细胞同时和细胞形成单层后)加入到培养的CEF中,通过测定细胞OD值和观察细胞形态学的变化判定安全浓度的范围。结果表明,各中药成分的最大安全浓度(μg.mL-1)分别为APS,1600;CAPS,1200;IRPS,600;AS,150;GS,120;PPS和EPS,40;EF和PF,20;AF,2.5。 3.中药成分对CEF增殖的影响 将十种中药成分分别稀释成安全浓度范围内的五种浓度,分别与CEF同时加入和CEF培养24 h后加入培养板,前者在加药后24、36、48、60、72 h、后者在加药后12、24、36、48、60 h用MTT法测定细胞OD值的动态变化,判定各中药成分对CEF增殖的影响。结果表明,同时加药时,所有成分均显著促进CEF增殖;细胞形成单层后加药时,As、APS、IRPS和PF促进细胞增殖,EPS抑制细胞增殖,其余五种成分在一定的浓度和时间点促进或抑制细胞增殖,且显示一定的量效和时效关系。 4.中药成分对病毒感染细胞能力的影响 将中药成分(浓度同3)和新城疫病毒以三种方式加入(先加入中药后接种病毒、先接种病毒后加入中药、中药与病毒混合感作后加入)到培养的CEF中,通过测定CEF OD值的变化评价各中药成分对病毒的感染细胞能力的影响。结果表明,几乎所有中药成分均能一定程度地抑制病毒感染细胞能力,其作用由强到弱的顺序依次为:AS>PPS>EF>IRPS>APS、AF>CAPS>EPS、PF、GS,且与浓度有一定的相关性;不同中药成分的作用机理不同,或直接杀灭病毒,或 中药成分对细胞增殖、病毒感染和抗体生成的影响 通过提高细胞抵抗力抑制病毒感染,或二者兼有。 5.中药成分对 ND疫苗免疫后抗体生成的影响用新城疫 IV系疫苗免疫雏鸡,试 验 1先免疫,然后分别注射高、低剂量的 CAPS、APS、IRPS、EPS、PPS、EF、PF、AS 和站等丸种中药成分,连续 3 k,分别于免疫后第 7、14、21、35天采血;试验 2 先用药(种类和剂量同试验1)3天,然后首免,两周后二免,于首免后第7、14、21、 28、35和49天采血。用卜微量法监测血清中血凝抑制杭体效价的动态变化.结果表 明,九种中药成分均能不同程度地提高抗体效价,且与给药时间、剂量和免疫次数有 一定的关系.