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目的通过建立病证结合风湿热痹RA大鼠模型,观察单味秦艽及秦艽不同配伍药对—秦艽+威灵仙(平温相配)、秦艽+桑寄生(平平相配)、秦艽+防己(平寒相配)对风湿热痹RA大鼠足跖肿胀度、免疫脏器指数、血沉(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)、血常规及血清抗环瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)、类风湿因子(Rheumatoid factor,RF)、C反应蛋白(Creactive protein,CRP)的影响;建立HPLC法同时测定秦艽及其不同配伍药对水煎液中两种环烯醚萜苷类成分獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量的方法,考察不同药性配伍药对对秦艽主要活性成分獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量的影响,进一步分析药效-药性-含量之间的关系。方法1.将80只SD大鼠用随机数字表法分为空白组、Ⅱ型胶原组、病证模型组(Ⅱ型胶原+风湿热)、阳性药组(雷公藤多苷)、单味秦艽组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组、秦艽防己组,共8组,每组10只。采用Ⅱ型胶原诱导并附加风湿热环境因素刺激的方法,建立符合中医“痹证”特点的病证结合风湿热痹RA大鼠模型。造模结束后,各中药组按25g/kg给予对应的药液灌胃,阳性药组按6 mg/kg给予雷公藤多苷灌胃,空白组、Ⅱ型胶原组及病证模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续21 d。整个实验中密切观察大鼠的一般状态、饮食、毛发等;实验中每3 d测量一次大鼠足跖肿胀度;实验第38 d,大鼠股动脉取血测定ESR和血常规;分离血清,用ELISA试剂盒测定大鼠血清中抗CCP抗体、IgG、RF及CRP水平变化;将大鼠处死后,进行胸腺、脾脏免疫脏器指数测定。2.采用Agilent A3000250×046 Pursuit 5 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇(B)-0.04%磷酸水溶液(A),梯度洗脱:0~28 min,B:15→23%,28~35 min,B:23→35%,流速:0.8 m L/min,柱温:30℃,检测波长245 nm,分析秦艽不同配伍药对中环烯醚萜苷类成分獐牙菜苦苷、龙胆苦苷的含量变化。3.综合分析不同药性配伍后秦艽主要活性成分獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量的变化与药效-药性-疗效之间的关系。结果1.各组大鼠足跖肿胀度变化结果表明:造模后,与空白组比较,各组大鼠肿胀度均逐渐升高,14 d时最为明显,差异有显著的统计学意义(P<0.01);给药后第21 d,与病证模型组比较,各给药组大鼠足跖肿胀度均有降低,除秦桑组外,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),尤以秦防组最明显,差异具有显著的统计学意义(P<0.01),秦威组、单味秦艽组次之。2.免疫脏器指数结果表明:各组大鼠的胸腺指数无差异(P>0.05)。与病证模型组比较,秦桑组、秦防组大鼠脾脏指数均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),尤以秦防组大鼠的脾脏指数降低明显,差异有显著的统计学意义(P<0.01);与阳性药组比较,秦防组大鼠脾脏指数降低,差异有统计学意义(P<0.05);与秦威组比较,秦防组大鼠的脾脏指数也降低,差异也具有统计学意义(P<0.05)。3.ESR结果表明:在12h时间点时,与空白组比较,Ⅱ型胶原组大鼠ESR加快,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ型胶原组比较,秦防组大鼠ESR减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。其余各个时间点各组之间均有ESR加快或减慢的趋势,但无统计学意义。4.血常规结果表明:在测定的18个指标中,其中2个指标[淋巴细胞百分比(the P ercentage of lymphocytes,LY%)、平均红细胞体积(Mean corpuscular volume,MCV))]的结果为各给药组之间相互比较均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),尤以秦防组(平寒相配)最显著;6个指标[单核细胞(Monocytes,MON)、单核细胞百分比(the Percent age of monocytes,MO%)、中性粒细胞(Neutrophils,NEU)、中性粒细胞百分比(the Perc entage of neutrophils,NE%)、血红蛋白(Hemoglobin,HGB)、血小板(Platelet,PLT)]的结果为各给药组与Ⅱ型胶原组或病证模型组比较,均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);6个指标[白细胞(White blood cell,WBC)、红细胞(Red blood cell,RBC)、红细胞分布宽度变异系数(Red blood cell distribution width coefficientof variation,RDW-C V)、平均血小板体积(Mean platelet volume,MPV)、红细胞压积(Hematocrit,HCT)、血小板压积(Platelet hematocrit,PCT)]的结果为与空白组比较,Ⅱ型胶原组或病证模型组升高或降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其余各组无统计学意义;4个指标[淋巴细胞(Lymphocytes,LYM)、平均红细胞血红蛋白(Mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(Mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)及血小板分布宽度变异系数(Platelet distribution width coefficient of variation,PDW-CV)]各组中的变化无统计学意义。5.各组大鼠抗CCP抗体、IgG、RF及CRP水平的变化:与空白组比较,Ⅱ型胶原组IgG、RF明显升高(P<0.01),病证模型组抗CCP抗体、IgG、RF及CRP水平均升高(P<0.05或P<0.01);与病证模型组比较,秦防组抗CCP抗体、IgG、RF及CRP水平降低最明显(P<0.01);各给药组间比较,秦防组中的抗CCP抗体、IgG、RF及CRP水平也降低最明显(P<0.01)。6.秦艽及其不同配伍药对中环烯醚萜苷类成分獐牙菜苦苷、龙胆苦苷含量测定结果:(1)獐芽菜苦苷含量测定结果表明:秦艽及配伍药对中獐芽菜苦苷含量的总趋势是:秦威药对(平温相配)>秦桑药对(平平相配)>秦防药对(平寒相配)>单味秦艽。(2)龙胆苦苷含量测定结果表明:秦艽及配伍药对中龙胆苦苷含量的总趋势是:秦威药对(平温相配)>单味秦艽>秦防药对(平寒相配)>秦桑药对(平平相配)。结论在风湿热痹RA模型大鼠中,与病证模型组比较,秦防组(平寒相配)疗效较好,秦威组(平温相配)次之,秦桑组(平平相配)、单味秦艽组更次,这与中医临床“疗寒以热药,疗热以寒药”的治疗原则基本符合。通过HPLC法同时测定秦艽及其不同配伍药对水煎液中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量,发现秦艽配伍用药后,有效成分含量确实有所改变,其中秦威组两种有效成分均升高。此研究结果与前期药效学实验结果风寒湿痹中,秦威组(平温相配)作用明显及在风湿热痹中,秦防组(平寒相配)、秦威组(平温相配)作用相近有一定的相关性,但这种成分含量的变化与药性寒热及临床疗效之间的关联性还需进一步深入研究。