研究背景目前,男性避孕药分为2类,即激素类和非激素类。男性激素类避孕药能够可逆性地抑制精子生成,从而达到避孕目的,但是,长期应用会引起各种全身性不良反应的发生。非激素类避孕药包括作用于睾丸(如棉酚)、附睾、精子动力、精子卵子融合的药物以及拮抗配子或激素的疫苗。但是截止目前为止,仍未有安全有效的非激素避孕药可用,而棉酚也仅处于第二阶段的研究。α1-肾上腺素受体拮抗剂目前已广泛应用于治疗由良性前列腺增生引起的下尿路症状,并已经应用到慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征和尿路结石的治疗中。由于α1-肾上腺素受体拮抗剂的适应症已扩展至更年轻的人群,因此它的不良反应,特别是射精功能障碍受到了越来越多的关注。在一组研究中,口服坦索罗辛病人有1.6%发生射精功能障碍,而服用西洛多辛病人有22.3%发生射精功能障碍。在另一项临床研究中,坦索罗辛使6名实验对象的射精量减少80%,其中5名实验对象显示无精子症。根据Hellstrom的研究,坦索罗辛可导致健康男性精子密度和精子总数的减少。精子运输是通过由交感神经系统支配的α1-肾上腺素受体介导的生殖道平滑肌的收缩完成的。α1-肾上腺素受体分为3个亚型,即α1A-、α1B-和α1D-肾上腺素受体。α1-肾上腺素受体在人类精囊中的分布：α1A为75.0±4.0%，α1B为11.7±3.1%,α1D为13.3±1.5%。而在人类射精管中,α1-肾上腺素受体的三种亚型的表达比值为97：0：3。α1A-肾上腺素受体也是前列腺平滑肌的主要亚型,主要介导前列腺平滑肌的收缩。因此,阻断α1A-肾上腺素受体可能抑制精囊和射精管平滑肌的收缩,防止精子运输,从而达到避孕的目的。到目前为止,通过干扰精子在生殖道内的运输以达到避孕目的的研究鲜有报道。坦索罗辛导致的射精功能障碍最初被认为是由于膀胱颈口松弛所致的逆行性射精引起的,但是最近泌精障碍被认为是主要原因。总之,不管是逆行性射精,还是泌精障碍,都为α1-肾上腺素受体拮抗剂作为一种男性避孕药的创新性应用提供了宝贵的线索。截至目前为止,尚未有探讨坦索罗辛作为一种避孕药的应用研究。鉴于以上问题,构成本研究的设计思路和研究目的。研究目的探讨α1A-肾上腺素受体拮抗剂坦索罗辛作为一种潜在的男性避孕药应用的有效性和安全性。研究对象与方法40名健康男性受试者被纳入研究。临床评估包括他们的健康状况,伴发疾病、药物使用史以及性欲等。禁欲3天后,在给予坦索罗辛或安慰剂之前,应用精子质量分析仪对所有受试者进行常规精液分析。我们按依次交叉的方式给予安慰剂和坦索罗辛(单次口服剂量为0.4mg或0.8mg),以消除药物和剂量间的偏倚。所有受试者随机分为2组(A组和B组)。A组依次给予安慰剂、0.4mg坦索罗辛和0.8mg坦索罗辛,B组按相反地顺序给予药物。每次给药之间有7天的间歇期。每次给药后4-6小时,通过手淫的方式取精,以评估每个受试者的射精情况,包括常规精液分析和射精后中段尿中的精子数量。同时记录性欲和坦索罗辛的不良反应。在间歇期内,每次给药前或每次收集精液前3天都不允许有包括手淫在内的性活动发生。结果所有受试者在服用0.8mg坦索罗辛后均发生了干燥射精；服用0.4mg的坦索罗辛后,有功能的精子总数显著减少。6名受试者表示服用0.8mg的坦索罗辛后出现可忍受的不适,其中1名受试者表示出现眼睑下垂、2名出现鼻塞、3名出现乏力。症状在服药10小时后消失。结论(1)坦索罗辛可导致男性射精异常；(2)坦索罗辛与男性射精异常存在剂量相关性。0.4mg的坦索罗辛使有功能的精子总数显著减少；0.8mg的坦索罗辛会导致干燥射精,并伴有短暂的不良反应。(3)α1A-肾上腺素受体拮抗剂坦索罗辛在将来可能成为一种男性避孕药,需进一步研究证实。研究背景及目的在过去的50年间,尽管女性避孕方法有了显著的进步,但是世界人口数仍在继续快速地增长,人口过剩问题成为造成全球环境破坏和人民苦难的主要根源。因此,目前很有必要增加更多有效的避孕方法来解决这个问题。而在针对美国及其他地区的调查中,发现包括输精管结扎术和男性避孕套在内的男性避孕方法几乎占了所有避孕方法的1/3。因此,发展男性避孕药成为一种新的趋势。理想的男性避孕药应该具备的特点为：①高效性,②很少的副作用,③容易服用,④可逆性。迄今为止,尚未有理想男性避孕药问世。众所周知,男性射精过程包括3阶段,即泌精、射精和膀胱颈口的关闭。这3个连续的生理过程受交感神经和副交感神经的精细调节,特别有赖于交感神经和α1A受体功能的完整性。阻滞α1A-R即可抑制这一过程,可能导致射精障碍发生。因此,alA受体拮抗剂作为男性避孕药的应用是男性节育的新领域。α1受体是一种Ca2+活化G蛋白偶联受体(GPCR),可激活细胞内多种信号转导途径,从而介导一系列生理和病理生理过程。α1受体可分为α1A、α1B、α1D三种亚型,各具不同药理学特性。在男性生殖系统中α1受体各亚型的分布和功能各有不同。射精障碍包括逆向射精和泌精障碍两种表现形式。Marco Grasso报道口服α1A受体拮抗剂因为松弛膀胱颈口出现逆向射精；而不同文献报道口服α1A受体拮抗剂所致射精障碍并非逆向射精,而是松弛生殖管道平滑肌所致的泌精障碍。男性口服超选择性α1A受体拮抗剂坦索罗辛及西罗多辛出现射精障碍的几率远远大于α1-受体拮抗剂阿呋唑嗪、哌唑嗪。我们前期已行临床试验,单次口服不同剂量的α1A受体拮抗剂坦索罗辛,测得0.8mg坦索罗辛后4-6小时可达到射精时完全无精液射出,且射精活动后第一次中段尿液测精液数量为零,7天后射精活动、精液恢复正常。说明坦索罗辛所致射精障碍为泌精障碍而非逆向射精。以此为基础,本研究以雄性大鼠为研究对象,进一步探讨alA受体拮抗剂坦索罗辛抑制射精的机制,为临床探索α1A受体拮抗剂作为男性避孕药方面提供理论依据和宝贵线索。研究方法1.α1A受体拮抗剂坦索罗辛对大鼠输精管组织内alA、α1B、α1D受体的表达水平的影响Wistar雄性大鼠24只,随机分为4组,每组6只,每日一次定时给予生理盐水或不同剂量坦索罗辛(分别为3ug/kg,6ug/kg,12ug/kg)灌胃,灌胃时间1月共30次。然后,解剖其输精管,提取输精管组织内的蛋白。采用Westernblot检测不同剂量坦索罗辛对大鼠精管组织内α1A、α1B、α1D受体的表达水平的影响。2.α1A受体拮抗剂坦索罗辛对大鼠输精管收缩活动的影响Wistar雄性大鼠24只,随机分为4组,每组6只,每日一次定时给予生理盐水或不同剂量坦索罗辛(分别为3ug/kg,6ug/kg,12ug/kg)灌胃,灌胃时间1周共7次。然后,解剖其输精管,连接张力换能器,记录给予去甲肾上腺素后,输精管的收缩曲线并记录收缩峰值与基线的差值。3.α1A受体拮抗剂坦索罗辛对大鼠射精功能的影响将24只健康雄鼠随机分为3组,即实验组A3、B3和对照组C3。实验组A38只雄性Wistar鼠每日灌服坦索罗辛(6ug/kg),实验组B3每日灌服坦索罗辛(12ug/kg),对照组C3灌服生理盐水(3m1)。1周后,将其与雌鼠交配,收集大鼠的精液后立即进行计数分析,检查大鼠的精液量、精子密度,从而估算精子总数。结果Western blot检测发现,服用α1A受体拮抗剂坦索罗辛后,α1A受体的表达水平增高,且为剂量依赖性；而α1B、α1D受体的表达水平未见类似变化。根据灰度值分析坦索罗辛对α1A受体表达水平的影响,A1组和D1组(对照组)的差异具有统计学差异,P<0.05；A1组和B1组的差异无统计学意义,P>0.05；A1组和C1组的差异具有明显的统计学差异,P<0.01。在连续给予坦索罗辛(α1A受体拮抗剂)1周后,离体情况下,大鼠输精管对去甲肾上腺素的反应性明显降低,随着剂量的增加,反应减弱。灌服坦索罗辛(α1A受体拮抗剂)1周后,将雌雄小鼠同笼交配,收集雄鼠的精液行计数分析,C3组(对照组)的平均精子总数为18.95±8.40×106,A3组为11.68±3.69×106,B3组为4.91±2.81×106/L。经过比较发现,A3组、B3组、C3组之间比较,均有统计学意义(P<0.05,见图2-5),且呈剂量依赖性。结论(1)α1A受体拮抗剂可选择性的阻断α1A受体的作用,对α1B、α1D受体的表达水平影响不大,且这种阻断作用具有剂量-效应作用；(2)离体情况下,α1A受体拮抗剂能明显抑制大鼠输精管对去甲肾上腺素的反应性,减少其蠕动幅度。此外,大鼠精液分析也显示α1A受体拮抗剂可以明显减少精子数目。(3)α1A受体拮抗剂可以通过抑制大鼠输精管的蠕动,抑制精液的输送,从而实现避孕。