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本研究以紫花苜蓿“中苜一号”作为试验材料,利用同源克隆技术,得到了紫花苜蓿过氧化物酶基因MsPOD cDNA全长,然后构建了植物表达载体,最终用农杆菌介导的方法将构建好的载体转化入拟南芥中,为进一步研究该基因的作用机制有着推进作用,也为研究该基因遗传转化对植物抗胁迫能力的提升奠定了良好的基础。本实验的研究结果如下:1、通过RT-PCR的方法从紫花苜蓿中克隆得到了MsPOD基因,通过对该基因的生物信息学分析得出,该基因的完整开放阅读框长1062bp,并编码353个氨基酸残基;对该基因的同源性及进化树分析得出,该基因与其他植物的过氧化物酶基因有着相当高的同源性,共同属于植物Ⅲ类过氧化物酶基因大家族,并隶属于分泌型过氧化物酶。2、通过实时定量RT-PCR方法分析了MsPOD基因在转录水平上的表达情况。结果显示,MsPOD基因在茎中表达量最高,而在根中表达最弱;结果表明,该基因的表达量在不同的处理时间段有着较为明显的差异,而且在不同的胁迫条件下,该基因有着其特有的表达形式,特别是在H202及NaCl处理条件下,基因的表达量有较为明显的上升。因而MsPOD基因共同受H202和盐的诱导表达。3、将克隆得到的MsPOD基因的完整CDS序列插入到pBIl21中,从而构建出植物超表达载体pBI-POD,并利用农杆菌介导法,将表达载体pBI-POD导入到拟南芥中,最终获得了13株卡纳霉素抗性苗,后经PCR及RT-PCR检测后,其中3株拟南芥苗呈阳性,对呈阳性的拟南芥植株进行GUS组织化学染色,结果表明,花序组织呈现蓝色,从而初步证实了该基因在拟南芥中成功表达。4、将含有完整开放性阅读框的MsPOD基因片段插入pA7-GFP构建了融合蛋白表达载体MsPOD-GFP,通过基因枪转化洋葱表皮细胞,利用激光共聚焦显微镜观察显示,该蛋白为核定位蛋白。