控制水稻茎秆粗细的OsTB1等位基因发掘与功能分析

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水稻是我国最重要的粮食作物,倒伏问题一直以来是其获得高产丰收的限制性因子,如何解决水稻倒伏问题成为提高水稻单产的关键。水稻茎秆支撑着整个植株的重量,其形态及强度决定了植株的抗倒伏能力,而水稻茎秆粗度是影响其强度和抗倒伏能力的重要因素。本研究利用已完成全基因组测序的籼稻品种9311和粳稻品种Nipponbare构建F2分离群体,以茎秆直径为指标对茎秆粗细性状进行遗传分析,并对一个控制茎秆粗细的主效QTL位点进行连锁分析和基因定位,最终将来源于9311的粗秆基因TC1定位到3号染色体长臂端RM168和RM1350两个标记之间的585 kb区间范围内。OsTB1(TEOSINTEBRAN HED1)是该区间内一个已报道水稻茎秆发育相关的基因,该基因表达量与茎秆粗壮程度表现出一定的正相关,其等位基因SCM3(S7TRONG CULM3)是一个控制水稻茎秆粗壮程度的主效QTL基因。通过对几个研究材料中该基因的表达量分析,我们发现粗秆品种9311及其与细秆品种Nipponbare的杂交后代F1表达量相比Nipponbare均有显著的提高,于此同时对众多水稻品种中该基因的一个重要位点进行检测和分析,我们发现检测材料中粗秆品种与9311表现一致,而细秆品种与Nipponbare表现一致,这些结果说明粗秆基因TC1可能是该基因的一个等位基因。最终我们通过遗传转化对该基因进行功能互补验证,证实了来自9311的粗秆基因TC1就是该基因的等位基因。实验同时对9311、Nipponbare、Kasalath和1060的该基因进行克隆并转化到该基因功能丧失型突变体fc1中,将有助于在相同背景下比较该基因不同等位类型对茎秆直径影响效应的强弱;同时构建了四个不同材料的该基因启动子活性分析载体,通过GUS染色分析了该基因的组织表达情况,为后期通过定量检测转基因植株中报告基因GUS的表达水平,比较这些启动子活性的强弱做了前期准备。并通过水稻原生质体瞬时表达系统完成了亚细胞定位,确定该基因在细胞核和细胞膜中遍布表达。此外,我们发现粗秆品种Kasalath该基因表达的异常,并对引起Kasalath的该基因表达量下调原因进行了探讨,设计相关实验对提出的推测进行验证。
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