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目的：本研究依托山东省自然科学基金，旨在观察半夏泻心汤治疗脓毒症胃肠功能障碍临床疗效，从PI3K/Akt/HO-1信号通路探讨半夏泻心汤对脓毒症大鼠肠道损伤的保护作用及其作用机制。
方法：(1)临床研究：收集2018年10月-2019年12月于山东中医药大学附属医院东院区重症医学科和急诊科住院治疗的脓毒症胃肠功能障碍患者，签署知情同意书，记录患者一般资料，随机分为治疗组和对照组，两组患者均予常规西医基础治疗，治疗组患者加服半夏泻心汤，日一剂，早晚分服，观察两组患者治疗前、治疗72h和治疗7天三个时间节点腹腔压、肠鸣音和血清二胺氧化酶、D-乳酸水平，并分析比较两组患者治疗前后APACHEⅡ评分、SOFA评分、胃肠功能障碍评分、中医证候积分以及ICU住院天数、28天病死率，评价半夏泻心汤治疗脓毒症胃肠功能障碍的临床疗效。(2)运用盲肠结扎法制备脓毒症大鼠模型，探究半夏泻心汤对脓毒症大鼠肠道损伤的保护作用：选取健康雄性SD大鼠90只，随机分为假手术组、CLP组、半夏泻心汤(低、中、高)治疗组，每组各18只。假手术组只进行开关腹处理，其余四组采用CLP法制备实验用脓毒症大鼠模型。半夏泻心汤低、中、高治疗组造模后按3.05g/kg·d-1、6.1g/kg·d-1、12.2g/kg·d-1药物剂量灌胃，正常组、CLP组以同等体积生理盐水灌胃。治疗24h后，每组各取8只大鼠，收集大鼠血清、小肠组织。观察各组大鼠一般状态、72h生存率；ELISA法检测血清二胺氧化酶、D-乳酸、内毒素和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)的水平；HE染色法观察各组脓毒症大鼠小肠组织病理结构；免疫组化法检测小肠组织炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)表达。(3)通过信号通路抑制剂处理，从正反两个方面说明半夏泻心汤对脓毒症肠损伤的保护作用和调控PI3K/Akt/HO-1机制：选取健康雄性SD大鼠50只，随机分为假手术组(Sham组)、模型组(CLP)组、半夏泻心汤组(BXXX组)、LY294002组(LY组)、LY+半夏泻心汤组(LY+BXXX组)，每组各10只。假手术只行开关腹处理，其余四组复制实验一脓毒症大鼠模型，LY294002组和LY+半夏泻心汤组于造模前腹腔注射LY294002。造模后半夏泻心汤组和LY+半夏泻心汤组按12.2g/kg药物剂量灌胃，正常组、CLP组和LY组均以等体积生理盐水灌胃。治疗24h后，收集大鼠血清、小肠组织。观察各组大鼠一般状态；ELISA检测血清DAO、D-乳酸、内毒素和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的水平；HE染色后观察小肠组织病理结构改变；WesternBlot和RT-PCR检测小肠组织炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)及PI3K、P-Akt、HO-1蛋白及mRNA表达。
结果：
(1)临床研究：①两组患者经规范化治疗后，腹内压和肠鸣音均有改善，血清二胺氧化酶和D-乳酸水平均下降，但半夏泻心汤治疗组明显优于对照组(P＜0.01)；②两组患者中医证候积分、APACHEⅡ评分、SOFA评分和胃肠功能障碍评分均下降，但半夏泻心汤治疗组下降更明显(P＜0.01)；③相较于西医单纯治疗，半夏泻心汤治疗能明显提高临床治疗总有效率(P＜0.01)；④半夏泻心汤治疗并未明显降低患者28天死亡率和缩短ICU住院天数(P＞0.05)，但半夏泻心汤治疗后，均呈一定下降趋势。
(2)实验研究一：①盲肠结扎法造模后大鼠出现运动迟缓、蜷缩、颤抖、拒捕反应减弱，毛发粗糙、凌乱、变黄，眼球充血等一系列症状，半夏泻心汤各治疗组上述症状较CLP组均有所改善；②半夏泻心汤各治疗组大鼠生存率明显高于CLP组，且半夏泻心汤高剂量组生存率最高，大鼠存活时间较长，优于其它两组；③半夏泻心汤各治疗组大鼠小肠组织损伤明显减轻，病理评分低于CLP组，且半夏泻心汤高剂量组肠组织损伤最轻；④半夏泻心汤治疗可明显降低脓毒症大鼠血清二胺氧化酶、D-乳酸、内毒素水平，高剂量组优于其它两组；⑤半夏泻心汤治疗能降低血清和小肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平，且有剂量依赖性。
实验研究二：与Sham组比较，CLP后各组大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达增高，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠损伤严重。与CLP组比较，半夏泻心汤干预后大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平下降，PI3K、P-Akt、HO-1表达增高，肠损伤减轻；LY294002处理后大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达下降，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠组织损伤加重。与半夏泻心汤组比较，LY+半夏泻心汤组大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达降低，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠组织损伤加重。本研究说明，半夏泻心汤抑制脓毒症时小肠组织炎症反应，减轻肠道组织损伤，或许与其调控PI3K/Akt/HO-1信号通路有关。
结论：(1)半夏泻心汤治疗脓毒症胃肠功能障碍疗效确切，能明显减轻患者腹胀腹痛、恶心呕吐、便秘或下利等临床症状，且能有效降低腹腔压和恢复肠鸣音，降低患者的病情危重程度，患者28天病死率和ICU住院天数虽无明显改变，但呈下降趋势。(2)动物实验研究发现，半夏泻心汤能抑制脓毒症时失控的炎症反应，减轻脓毒症大鼠的肠道损伤，并提高大鼠生存率，且具有剂量依赖性，并且这一保护作用可能是通过调控PI3K/Akt/HO-1信号通路实现的。
方法：(1)临床研究：收集2018年10月-2019年12月于山东中医药大学附属医院东院区重症医学科和急诊科住院治疗的脓毒症胃肠功能障碍患者，签署知情同意书，记录患者一般资料，随机分为治疗组和对照组，两组患者均予常规西医基础治疗，治疗组患者加服半夏泻心汤，日一剂，早晚分服，观察两组患者治疗前、治疗72h和治疗7天三个时间节点腹腔压、肠鸣音和血清二胺氧化酶、D-乳酸水平，并分析比较两组患者治疗前后APACHEⅡ评分、SOFA评分、胃肠功能障碍评分、中医证候积分以及ICU住院天数、28天病死率，评价半夏泻心汤治疗脓毒症胃肠功能障碍的临床疗效。(2)运用盲肠结扎法制备脓毒症大鼠模型，探究半夏泻心汤对脓毒症大鼠肠道损伤的保护作用：选取健康雄性SD大鼠90只，随机分为假手术组、CLP组、半夏泻心汤(低、中、高)治疗组，每组各18只。假手术组只进行开关腹处理，其余四组采用CLP法制备实验用脓毒症大鼠模型。半夏泻心汤低、中、高治疗组造模后按3.05g/kg·d-1、6.1g/kg·d-1、12.2g/kg·d-1药物剂量灌胃，正常组、CLP组以同等体积生理盐水灌胃。治疗24h后，每组各取8只大鼠，收集大鼠血清、小肠组织。观察各组大鼠一般状态、72h生存率；ELISA法检测血清二胺氧化酶、D-乳酸、内毒素和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)的水平；HE染色法观察各组脓毒症大鼠小肠组织病理结构；免疫组化法检测小肠组织炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)表达。(3)通过信号通路抑制剂处理，从正反两个方面说明半夏泻心汤对脓毒症肠损伤的保护作用和调控PI3K/Akt/HO-1机制：选取健康雄性SD大鼠50只，随机分为假手术组(Sham组)、模型组(CLP)组、半夏泻心汤组(BXXX组)、LY294002组(LY组)、LY+半夏泻心汤组(LY+BXXX组)，每组各10只。假手术只行开关腹处理，其余四组复制实验一脓毒症大鼠模型，LY294002组和LY+半夏泻心汤组于造模前腹腔注射LY294002。造模后半夏泻心汤组和LY+半夏泻心汤组按12.2g/kg药物剂量灌胃，正常组、CLP组和LY组均以等体积生理盐水灌胃。治疗24h后，收集大鼠血清、小肠组织。观察各组大鼠一般状态；ELISA检测血清DAO、D-乳酸、内毒素和炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的水平；HE染色后观察小肠组织病理结构改变；WesternBlot和RT-PCR检测小肠组织炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)及PI3K、P-Akt、HO-1蛋白及mRNA表达。
结果：
(1)临床研究：①两组患者经规范化治疗后，腹内压和肠鸣音均有改善，血清二胺氧化酶和D-乳酸水平均下降，但半夏泻心汤治疗组明显优于对照组(P＜0.01)；②两组患者中医证候积分、APACHEⅡ评分、SOFA评分和胃肠功能障碍评分均下降，但半夏泻心汤治疗组下降更明显(P＜0.01)；③相较于西医单纯治疗，半夏泻心汤治疗能明显提高临床治疗总有效率(P＜0.01)；④半夏泻心汤治疗并未明显降低患者28天死亡率和缩短ICU住院天数(P＞0.05)，但半夏泻心汤治疗后，均呈一定下降趋势。
(2)实验研究一：①盲肠结扎法造模后大鼠出现运动迟缓、蜷缩、颤抖、拒捕反应减弱，毛发粗糙、凌乱、变黄，眼球充血等一系列症状，半夏泻心汤各治疗组上述症状较CLP组均有所改善；②半夏泻心汤各治疗组大鼠生存率明显高于CLP组，且半夏泻心汤高剂量组生存率最高，大鼠存活时间较长，优于其它两组；③半夏泻心汤各治疗组大鼠小肠组织损伤明显减轻，病理评分低于CLP组，且半夏泻心汤高剂量组肠组织损伤最轻；④半夏泻心汤治疗可明显降低脓毒症大鼠血清二胺氧化酶、D-乳酸、内毒素水平，高剂量组优于其它两组；⑤半夏泻心汤治疗能降低血清和小肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平，且有剂量依赖性。
实验研究二：与Sham组比较，CLP后各组大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达增高，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠损伤严重。与CLP组比较，半夏泻心汤干预后大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平下降，PI3K、P-Akt、HO-1表达增高，肠损伤减轻；LY294002处理后大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达下降，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠组织损伤加重。与半夏泻心汤组比较，LY+半夏泻心汤组大鼠血清和肠组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高，PI3K、P-Akt、HO-1表达降低，血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平升高，肠组织损伤加重。本研究说明，半夏泻心汤抑制脓毒症时小肠组织炎症反应，减轻肠道组织损伤，或许与其调控PI3K/Akt/HO-1信号通路有关。
结论：(1)半夏泻心汤治疗脓毒症胃肠功能障碍疗效确切，能明显减轻患者腹胀腹痛、恶心呕吐、便秘或下利等临床症状，且能有效降低腹腔压和恢复肠鸣音，降低患者的病情危重程度，患者28天病死率和ICU住院天数虽无明显改变，但呈下降趋势。(2)动物实验研究发现，半夏泻心汤能抑制脓毒症时失控的炎症反应，减轻脓毒症大鼠的肠道损伤，并提高大鼠生存率，且具有剂量依赖性，并且这一保护作用可能是通过调控PI3K/Akt/HO-1信号通路实现的。