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线粒体外膜上存在一类电压依赖性的阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)蛋白,它能让一些小分子物质(如ATP、ADP)、DNA以及tRNA等进出线粒体。VDAC蛋白也在细胞质膜、肌质网、叶绿体等观察到。本实验室前期利用生物信息学方法,从水稻品种日本晴的基因组中鉴定出8个VDAC异构体。本文选取其中OsVDAC2、3、5、7为研究对象,通过原生质体转化及基因枪转化手段进行亚细胞定位的研究。主要结果如下:1、依据OsVDAC2和OsVDAC7基因的ORF序列设计特异引物,从水稻品种日本晴的叶片cDNA中扩增得到目的片段,构建了pM999-OsVDAC2-GFP和pM999-OsVDAC7-GFP融合表达载体。2、将实验室前期已构建的pM999-OsVDAC3-GFP和pM999-OsVDAC5-GFP转化原生质体摸索最佳观察时间。结果表明,在原生质体转化16 h观察最佳,当转化至20 h后出现蛋白聚集现象;OsVDAC2和OsVDAC7定位在细胞质中,OsVDAC3在细胞核与细胞质膜都有定位,但无法确定信号肽在哪端;OsVDAC5也在细胞核与细胞质膜上均有定位,同样无法确定信号肽在哪一端。3、用基因枪法将不同表达载体转化洋葱表皮,摸索最佳轰击参数及质粒浓度,结果表明,在质粒浓度为1μg/μL,轰击距离定位6 cm及轰击压力为1100 psi时,转化效率最高。在此条件下,OsVDAC3蛋白在细胞核、细胞质膜和分泌小泡上均有定位且定位信号肽在N端;OsVDAC5蛋白在细胞核、细胞质膜和分泌小泡上均有定位且定位信号肽在C端。