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研究背景:功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是一种常见的功能性胃肠道疾病,常常伴随有胃部痛敏反应。目前胃部痛敏的发病机制尚不清楚。我们实验室以往的研究证明,孕期应激(prenatal maternal stress,PMS)能够诱导子代大鼠胃部痛敏,并且上调胃相关背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内酸敏感离子通道1(acid-sensing ion channels 1,ASIC-1)的蛋白表达,同时降低DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)的 mRNA 水平。在胚胎发育过程中,叶酸(folic acid,FA)可改善胚胎内环境,预防神经系统疾病的发生;在缺血性损伤模型中,叶酸能够提高神经元的存活和再生,这为叶酸治疗神经病理性疼痛提供了证据。因此,本研究旨在探讨叶酸对PMS子代大鼠胃部痛敏的作用及其分子机制,希望为临床慢性内脏痛敏患者的治疗提供理论依据和新的方案。实验方法:1.胃部痛敏模型的建立:成年SD大鼠分成PMS组和空白对照(CON)组,PMS大鼠从怀孕第七天开始进行异源型间隙性应激,直至21天或分娩;CON大鼠不做任何处理。子代大鼠出生后,选择雄性进行后续实验观测。2.胃部痛敏行为的检测:应用胃部球囊扩张和肌电图技术检测大鼠胃部痛敏。3.胃特异性感觉神经元的标记:通过胃壁注射荧光染料DiI逆行标记胃特异性DRG神经元,后续进行电生理和免疫荧光检测。4.神经元兴奋性检测:运用全细胞膜片钳技术检测胃特异性DRG神经元的兴奋性。5.分子表达检测:运用RT-PCR和Western Blotting技术检测ASIC-1与DNMT-1等分子在大鼠胃相关DRGs内的表达水平。6.免疫荧光检测:运用免疫荧光技术检测ASIC-1与DNMT-1在大鼠胃相关DRG的表达和定位。7.给药方法:通过鞘内微量注射法给予LV-DNMT-1或后,检测PMS大鼠胃特异DRG神经元的兴奋性及胃部痛敏状态;给予PMS孕鼠腹腔注射叶酸后,检测其子代成年大鼠胃特异DRG神经元的兴奋性及胃部痛觉反应;给予PMS孕鼠腹腔注射叶酸后,再行PMS子代成年大鼠鞘内注射DNMT-1抑制剂(DC-517),检测子代大鼠胃部痛敏反应和ASIC-1蛋白表达。实验结果:1.PMS诱发成年子代7周龄大鼠出现胃部痛敏反应,且伴随DNMT-1蛋白和mRNA水平的显著降低。2.过表达LV-DNMT-1显著缓解PMS大鼠胃部痛敏反应,并显著降低PMS大鼠胃特异性DRG神经元的兴奋性。3.孕鼠腹腔注射叶酸显著缓解PMS大鼠胃部痛敏反应和降低PMS大鼠胃特异DRG神经元的兴奋性。4.鞘内注射DNMT-1的抑制剂DC-517显著阻断叶酸对PMS大鼠胃部痛敏的缓解作用。5.ASIC-1与DNMT-1在PMS大鼠胃特异性DRG神经元内共表达。6.鞘内注射LV-DNMT-1或孕鼠叶酸处理翻转PMS大鼠胃相关DRGs中ASIC-1蛋白的高表达。7.鞘内注射DNMT-1抑制剂DC-517翻转孕鼠叶酸处理对PMS大鼠DRGs中ASIC-1蛋白表达的抑制作用。实验结论:PMS诱导子代大鼠胃部痛敏,且伴随ASIC-1蛋白高表达及DNMT-1蛋白和mRNA水平降低。叶酸通过上调DNMT-1来翻转ASIC-1高表达进而缓解PMS诱导的胃部痛敏。