【摘 要】
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目的:根尖周炎是指根尖周区域的炎症性疾病,发病原因以细菌因素为主。以粪肠球菌为代表的顽固性细菌在适宜条件下形成细菌生物膜的能力和根管系统的复杂性（根管侧支、根尖分叉、根尖分歧等）等诸多因素导致现阶段的治疗手段（机械清理、药物冲洗等）无法彻底地清除细菌生物膜。本课题组前期工作已证实低温大气压等离子体（CAP）对多种细菌的杀灭作用。在前期基础上,课题组研制了一台新型等离子体射流治疗仪,拟对该机器产生的
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81701035＆81500847）； 湖北省科技支撑计划（2020BCB057）；
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目的:根尖周炎是指根尖周区域的炎症性疾病,发病原因以细菌因素为主。以粪肠球菌为代表的顽固性细菌在适宜条件下形成细菌生物膜的能力和根管系统的复杂性（根管侧支、根尖分叉、根尖分歧等）等诸多因素导致现阶段的治疗手段（机械清理、药物冲洗等）无法彻底地清除细菌生物膜。本课题组前期工作已证实低温大气压等离子体（CAP）对多种细菌的杀灭作用。在前期基础上,课题组研制了一台新型等离子体射流治疗仪,拟对该机器产生的活性粒子成分进行诊断分析,并探索CAP射流对根尖周炎关键致病菌—粪肠球菌的即刻和持续杀灭效应,以及评价CAP射流在比格犬根尖周炎动物模型中的辅助治疗效果。方法:设计和研制了一台新型等离子体射流治疗仪,用辐射光谱法测定活性粒子种类,用激光诱导荧光法测定活性粒子相对强度。将粪肠球菌培养于胶原纤维包被的羟基磷灰石圆片,形成7天和21天的粪肠球菌生物膜。将样本分为生理盐水处理组、CAP射流处理组和2%洗必泰处理组。分组处理后继续培养3天和7天,得到即刻杀灭后样本和杀灭后再培养样本。样本脱水固定后利用扫描电镜进行形态学观察;样本经荧光染料处理后,在激光共聚焦显微镜下采集荧光强度行三维重建,继而分析死菌/（活菌+死菌）比例。在人牙本质小管内对粪肠球菌生物膜培养7天和21天,如前述分组后,荧光染料处理后,在激光共聚焦显微镜下采集荧光强度行三维重建,继而分析死菌/（活菌+死菌）比例。对四只成年比格犬进行根尖周炎的造模实验,牙片和CBCT显示根尖部阴影后,进行常规根管治疗。将犬不同分区牙位随机分为生理盐水处理组、CAP射流组、2%洗必泰处理组和阴性对照组。进行常规根管预备,常规根管冲洗和前述分组的辅助治疗,最后进行常规根管充填。治疗后第30/60/90/120天利用根尖X片进行二维影像学面积分析;治疗后第120天利用CBCT进行三维影像学体积分析。处死实验动物后,对根尖周组织行HE染色、Masson染色和免疫组化染色,评估不同处理组对犬根尖周组织的干预效果。结果:新研制的CAP射流治疗仪运行稳定,射流温度接近室温。谱线强度以N2、He和O为主。O和OH的荧光强度在喷嘴处2～5mm呈相对高值。对于HA上的粪肠球菌体外生物膜,无论是7天还是21天样本,相对于生理盐水组,等离子体组和洗必泰组均能显著性杀灭生物膜中细菌（P＜0.05）;在3天和7天的再培养后,两种治疗手段的灭菌水平相对于生理盐水组仍具备显著性差异。对于体外人牙本质小管的粪肠球菌生物膜,无论是7天还是21天样本,等离子体组相对于洗必泰组具备杀灭更多细菌的能力（P＜0.05）。根尖X线片和CBCT显示比格犬根尖周炎模型成功建立。根尖X线片显示,从治疗后90天开始直到治疗后120天,等离子体组相对于洗必泰组,根尖病损面积减少率具备显著性差异（P＜0.05）;CBCT显示,在治疗后第120天,等离子体组相对于其他治疗组具备最小的根尖病损区重建体积（P＜0.05）。H＆E染色和Masson染色显示等离子体组的根尖病损区呈现相对明显的骨组织修复表现,ALP免疫指标相对于其他治疗组呈现相对高表达。结论:将CAP射流作为根管治疗的辅助治疗手段,可以在影像学和组织学上观察到相对于传统根管冲洗药物更好的病损愈合表现。表明CAP射流作为一种根管消毒技术辅助进行根管治疗,具备潜在应用前景。
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