RAPD鉴别片形吸虫及相关应用研究

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片形吸虫属于片形科(Fasciolidae Raillet,1895)的片形属(Fasciola Linnaeus,1758)。据Yamaguti(1972)分类记载,该属吸虫有6个种,其中寄生在家畜和人体的主要是肝片吸虫(Fasciola hepaticaLinneuus,1758)和大片吸虫(Fasciola gigantica Cobbold,1855)。两虫不仅危害大,而且形态极相似。本实验室在南京市江宁县采集的片形吸虫中,发现了一些形态不典型的片形吸虫。为了确认该虫的分类地位,本实验室从形态学方法及RAPD技术对该片吸虫进行区分。此外还就RAPD的重复性等方面作了一些探讨,结果如下: (1)本实验以来自广西、广州、内蒙、黑龙江、江苏、英国、德国等形态典型的片形吸虫为对照,以虫体的肩部、体长、体宽及其比值为标准,对采自江苏江宁县的肩部特征不典型片形吸虫进行形态学研究。从虫体的体长、体宽及其比值来看,该片形吸虫介于肝片形吸虫和大片形吸虫之间;而从虫体的肠分支来看,则应为大片形吸虫。 (2)随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对6株片形吸虫总DNA进行扩增,结果10条中有8条引物能产生扩增图谱,电泳图谱经聚类分析后,与传统的分类结果一致,表明来自江宁的片形吸虫既有形态典型的肝片形吸虫也有形态不典型的大片形吸虫。 (3)RAPD的重复性一直是研究人员关注的问题。本实验以江宁肝片形吸虫为试验材料,探讨了PCR仪、不同批次的Taq酶对RAPD重复性的影响。结果表明不同PCR仪对试验存在影响,而不同批次的Taq酶对试验的影响则未检测出来。 此外,本实验还运用RAPD技术对肝片形吸虫、长菲策吸虫及日本血吸虫进行扩增,结果筛选到三条RAPD条带,分别为三种吸虫所特有,可望发展成蠕虫学中具有虫卵鉴别意义的探针。
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