肺癌是人类高发恶性肿瘤，其死亡率在我国的肿瘤性疾病中为第二位；在城市其死亡率为第一位；而且肺癌的发病率在我国一直呈上升趋势，严重危害人类健康。降低肺癌死亡率的策略无非在于三个方面：预防、早期诊断和完善治疗方案。目前从国内外研究来看，早期诊断，尤其是分子细胞学诊断可能是最有效的途径之一。因此，寻找有效的早诊、分期分型以及预后的分子生物学标志物和建立有效的辅助性分子诊断方法，有着重要的理论意义和光明的应用前景。同时，深入研究肺癌发生的分子细胞遗传学、尤其是癌前病变的分子机理，不仅可为肺癌的预防、早诊和治疗以及预后提供理论依据，而且有利于从根本上控制肺癌这一恶性肿瘤。 为了筛选较好的分子标记，我们从肺癌分子细胞遗传学入手，利用原位杂交技术，分析肺癌病人痰细胞中细胞遗传学改变；利用原位杂交技术和频谱式染色体核型分析法，检测了永生化人支气管上皮细胞系M、Y中细胞遗传学异常改变。从肺癌遗传外改变入手，利用甲基化特异性PCR技术检测肺癌病人肿瘤、血浆和痰标本中抑癌基因异常甲基化改变；利用全基因组甲基化检测方法扫描了肺癌组织中基因组范围内DNA甲基化的改变情况。结果发现：一、痰细胞标本中染色体数目异常和FHIT基因缺失1、系统分析了1，3，6，7，8，9，10，11，12，15，17，18，X，Y染色体在肺癌病人痰细胞中染色体异常改变，发现染色体拷贝数的异常改变(增加和／或减少)是肺癌中常见的现象，且具有高度复杂性和随机性。从整体上看，1，3，7，8，X等染色体以拷贝数增高为主；9，15、17以拷贝数减少第三军医大学博士研究生论文 肺癌染色体和DNA甲基化异常改变及其诊断价值的研究 为主；6，10，11，12，18，Y等染色体增加与减少共存，没有明显的差 异。此外，同一病例痰细胞中染色体数目异常通常涉及多条染色体，且 同一条染色体数目改变不止一种类型，说明在肺癌发生过程中整个染色 体水平上的调控机制出现紊乱。2、就肺癌痰细胞中染色体数目异常（增加和／或减少）作为肺癌诊断的辅助 指标来看，其特异性和敏感性均明显高于传统的疾细胞学诊断。17，18 号染色体对肿瘤检出率最高O．7O，83、9O），其次是 7，8，9，10，11， 12和X染色体；同时使用任意两条染色体组合对肺癌的检出率可达80％ 以上，说明染色体数目异常（增加或减少）是肺癌辅助诊断较好的指标。3、FHIT基因外显子1，5，6．7在痰细胞中的缺失率均较高，FHIT基因外 显子缺失主要表现为相对缺失，至少一个外显子发生缺失的比例为 76．0％＊），表明FHH基因外显子缺失是其在肺癌中失活的机制之一， 并可作为肺癌诊断的指标。4、我们建立的改良的痰细胞FISH标本制备和分析方法，降低了背景的干扰， 且探针更易于穿透细胞，其杂交信号检测的准确度和信号的强度均较高。 本研究利用多个染色体特异性探针较系统地分析了肺癌痰标本中染色体异常改变，在国内外尚未见相关报道。我们的研究表明染色体拷贝数的异常改变 市癌病人痰标本中常见的现象，是肺癌辅助诊断较好的指标之一；同时，改良的疾细胞FISH标本制备和分析方法为痰细胞分子遗传学研究奠定了基础。二、永生化人支气管上皮细胞系M、Y细胞中分子细胞遗传学异常改变 永生化的人支气管上皮细胞是目前研究肺癌癌变过程中分子遗传学机理的重要体外模型之一。在本研究中，我们分析了处于癌前病变阶段的人支 8 第三军医大学博士研究生论文 肺癌染色体和DNA甲基化异常改变及其诊断价值的研究 气管上皮细胞系M、Y细胞在永生化过程中的分子细胞遗传学异常改变。 1、不同代龄M、Y细胞中3p异常改变的FISH分析： l）M细胞中，3plZ，3pl3，3pl4，3pZI，3p22－23和3p24主要表现为缺 失。在早代龄细胞中有一定比例的特异性缺失和纯合缺失：随着细胞 代龄的增加，主要表现为随3号染色体拷贝数的增加而发生特异性丢 失。3pl4和3p24在早代龄细胞门 代）中有明显易位；3p25和3p26 在早、中、晚代龄细胞中，主要表现为易位；在晚代龄细胞中（180 代），90％以上的细胞具有这一改变。利用染色体着丝粒探针和染色体 涂染探针对3p25上6断裂点进行了分析，结果发现3p25易位到染色 体11pl415 之间。 2）Y细胞中，3plZ、3p13、3pl4、3pZI、3p22－23和3p24、3p25、3p26 在早代龄中均仅有一个拷贝，在体外培养进程中，3plZ、3pl3、3pl4、 3pZI、3p22毛3、3p24主要随着3号染色体数目的增加拷贝数相应增 加，但没有发生明显的相对丢失。3p25、3p26在晚代细胞中具有较 高易位率产70叨。 2、利用SKY进一步分析了39代龄Y细胞分子细胞遗传学改变情况，发 现在Y细胞中存在一系列染色体缺失和?