台湾独蒜兰组织培养的研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tengyao2009
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为保护野生台湾独蒜兰(Pleione formosana),尽快建立台湾独蒜兰的快繁体系,本文对江西井冈山野生台湾独蒜兰进行引种到温室栽培,进行人工授粉,所得蒴果和野生植株蒴果一同作为本研究的试验材料。将蒴果进行4℃低温保存,经0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、10 d、13 d、20 d、25 d、30 d保存后对种子进行活性检测,以6-BA、NAA为2因素,各取3水平设计种子无菌萌发的试验;以无菌萌发得到的原球茎为材料,以6-BA、NAA、蔗糖为3因素设计原球茎增殖的正交试验,以6-BA、NAA、TDZ为3因素设计原球茎膨大的正交试验;以前者萌发得到的原球茎为外植体,以6-BA、NAA、TDZ为3因素设计原球茎分化的正交试验,以MS、1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的NAA设计台湾独蒜兰幼苗的生根试验;以75%酒精、0.1%升汞、饱和次氯酸钙为消毒剂,采用单次和二次消毒方法对台湾独蒜兰根进行消毒,用切段和研磨两种方法进行接种,分离提取菌根内生真菌,探究台湾独蒜兰根较好的消毒方法,以木屑和树皮等比例混合物为培养基,将分离得到的菌根真菌和保存的种子共生萌发培养,寻找能够促进种子萌发的真菌。1、低温贮藏对种子活性0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、10 d、13 d、20 d、25 d、30 d进行种子活性的检测,0 d种子活性为76.25%,1 d种子活性为80.84%,2 d种子活性最高,为93.87%,3 d种子活性为92.24%并开始下降,在20 d的时候种子活性为83.28%,30 d时候种子活性下降到65.80%,由此可见最佳的播种时间为采摘贮藏2 d,最好在20 d内进行播种;通过观察统计无菌萌发的萌发率均达到90%以上,其中最早萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,但是后期分化的幼芽体势较弱;萌发后原球茎保持时间较久的培养基配比为1/2MS+0..5~1.0 mg/L NAA。2、最佳原球茎增殖的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖,增殖系数为3.150。通过分析增殖系数主体间效应检验得出6-BA、NAA对原球茎增殖作用显著,蔗糖对原球茎的增殖作用不显著。3、最佳蔗糖膨大培养基为MS(固体)+6%蔗糖,膨大系数为3.065;最佳激素膨大培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA,膨大系数为3.205,6-BA和NAA对原球茎膨大作用显著,同时得出NAA比6-BA作用效果更显著,TDZ对原球茎膨大作用不显著。4、最佳分化培养基为MS+0.6 mg/L TDZ+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,分化率为84.1%,6-BA和NAA对原球茎分化效果显著,TDZ对原球茎分化效果极显著;最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,生根率为85.4%,总株数为120株,总生根条数为213条,平均生根数为1.8条/株。5、优化的消毒步骤为75%酒精30 s→0.1%升汞60 s,90 s,120 s,接种方法为研磨接种,分离提取到73种真菌;经过共生萌发培养,发现7种内生真菌不能促进种子萌发,66种内生真菌能够促进种子萌发形成原球茎,其中29种能够促进种子萌发形成黄绿色原球茎,37种能够促进种子萌发形成绿色原球茎;随着培养时间的增加,所有萌发的原球茎均没有进行分化形成幼苗。
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