目的:克隆Serratia sp.S2中的铬(VI)抗性蛋白编码基因ChrA1、B、A1B片段,构建其原核表达载体并转化至E.coli BL21中。通过研究工程菌的抗铬(VI)能力及特性,探索ChrA1和ChrB基因在抗铬(VI)过程中的作用及铬代谢机制。方法:以Serratia sp.S2全基因组为模板,采用PCR扩增ChrA1、B、AB基因,连接至表达载体pET-28a(+),并转化至E.coli BL21表达以构建工程菌。测定工程菌含铬(VI))生长曲线,胞内铬吸收和铬外排能力,确定ChrA1、B的抗铬(VI)功能。探索铬(VI)负载时间、呼吸抑制剂(缬氨霉素、寡霉素、CN~-、NADH)和含氧阴离子(硫酸盐、钼酸盐、钒酸盐、钨酸盐)对工程菌铬外排的影响,分析ChrA1、B蛋白转运铬(VI)的机制。结果:通过基因重组技术,成功构建出ChrA1、ChrB、ChrA1B工程菌。ChrA1、ChrA1B工程菌的抗铬能力强于Control strain[pET-28a(+)-E.coli BL21],可显著降低对铬的吸收(P<0.05),提高铬外排速率(P<0.05),但ChrB抗铬(VI)能力与Control strain相比差异不具有统计学意义(P>0.05)。ChrA1、ChrA1B工程菌的铬(VI)外排速率随着负载时间的延长而降低;且受到含氧阴离子硫酸盐和钼酸盐显著抑制(P<0.05);在呼吸抑制剂类别中,K~+载体缬氨霉素和CN~-显著性抑制工程菌铬外排,NADH促进其铬外排(P<0.05)。结论:ChrA1基因的表达可提高大肠杆菌的铬(VI)抗性能力,其编码的ChrA1铬转运蛋白是利用质子动力通过细胞膜化学渗透作用把铬泵出细胞外;ChrB基因可能调控A1基因使ChrA1B对铬(VI)的抗性及外排能力均强于ChrA1。