论文部分内容阅读
目的：1.通过蛋白质组学的方法研究慢性髓系白血病（CML）阿霉素敏感细胞（K562）、阿霉素耐药细胞（K562/ADM）和阿霉素脱药细胞（K562/ADM drugfree）之间蛋白的表达差异，探讨差异蛋白在肿瘤多药耐药中的作用，为逆转肿瘤耐药提供新的理论基础。2.研究前期筛选获得的bFGF拮抗肽P7对bFGF诱导的胃癌细胞对阿霉素（ADM）耐药的影响，并探讨其相关机制。方法：1.采用MTT法检测K562、K562/ADM和K562/ADM drug free细胞对阿霉素作用的敏感性；通过蛋白质组学的方法获得三种细胞之间的差异表达蛋白；RT-qPCR和westen blotting验证差异蛋白表达的变化；siRNA干扰下调差异蛋白在K562/ADM细胞中的表达；采用DNA重组技术构建差异蛋白的表达载体，G418筛选获得稳定过表达差异蛋白的K562细胞；MTT检测差异蛋白表达的改变对细胞的阿霉素耐药性的影响。2.采用MTT法检测P7对bFGF诱导的胃癌细胞SGC-7901对阿霉素耐药的影响；通过Alexa Fluor488AnnexinV/PI双染结合流式细胞术检测SGC-7901细胞凋亡；Western blotting分析P7对SGC-7901细胞内PI3K/Akt信号通路的活化以及细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：1. K562、K562/ADM和K562/ADM脱药细胞的半效抑制浓度（IC50）分别为（0.465±0.04）ug/ml、（26.84±0.43)ug/ml和（17.56±0.52）ug/ml，K562/ADM脱药细胞的IC50低于K562/ADM耐药细胞的IC50，表明在没有阿霉素存在的条件下，K562/ADM细胞的耐药性降低；通过蛋白质组学的方法获得11种差异蛋白，其中差异蛋白Galetin-1的表达水平在K562/ADM耐药细胞中较在敏感细胞和脱药细胞中分别增加34.97倍和4.75倍；RT-qPCR和westen blotting也进一步验证了差异蛋白Galetin-1在三种细胞中的表达情况；siRNA下调Galetin-1在耐药细胞株中的表达可增强细胞对阿霉素的敏感性，而在敏感细胞中稳定过表达Galetin-1可使细胞对阿霉素的敏感性降低。2. P7可逆转bFGF诱导的SGC-7901细胞对阿霉素的耐药，其机制可能通过拮抗bFGF对阿霉素诱导的SGC-7901细胞凋亡的抑制作用、下调bFGF刺激的Akt活化水平，以及反向调节bFGF上调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP和下调促凋亡蛋白Bax的表达。结论：1.我们首次通过蛋白质组学方法鉴定了一种新的与CML细胞耐药密切相关的蛋白Galetin-1，可能作为逆转CML细胞耐药治疗的新靶点，同时也可能作为CML耐药诊断的一种新的分子标记。2.我们前期筛选获得的bFGF结合肽P7可通过以bFGF为靶标逆转化疗耐药，在胃癌的耐药治疗上可能具有一定潜能。