HIV（human immunodeficiency virus）即人类免疫缺陷病毒,能够感染人类免疫系统引起艾滋病的发生。HIV-1在感染宿主细胞后,其辅助蛋白Vif招募胞内泛素相关支架蛋白Cullin5（CRL5）、接头蛋白ElonginB（EloB）和ElonginC（EloC）以及T细胞趋化因子CBF-β形成E3泛素连接酶复合物,对胞内宿主限制因子APOBEC3G蛋白（A3G）进行泛素化标记,使其通过蛋白酶体途径被降解,从而拮抗A3G抗HIV-1的功能。如果阻断Vif与复合物中其它蛋白间的结合作用,抑制E3复合物的形成,那么A3G蛋白将不被降解从而被包装进新生HIV-1病毒颗粒内,发挥其胞嘧啶脱氨酶活性,对HIV-1基因组造成高频突变达到抑制HIV-1病毒复制的效果。在以往的研究中,研究者利用计算机辅助药物设计、基于荧光共振能量转移的高通量筛选和噬菌体表面展示技术等方法发现了多种具有抗HIV作用的药物。在以抑制Vif-E3泛素连接酶复合物形成为靶点方面,已经有多篇阻断Vif寡聚、阻断Vif结合A3G和阻断Vif结合EloC的抑制剂的研究被报道。多种结果表明,阻断Vif-E3复合物的形成,将会抑制Vif介导的对A3G蛋白的降解作用,并且能对多种亚型的HIV-1病毒产生一定抑制作用。而在E3复合物的多个蛋白-蛋白相互结合界面中,由于Vif与CBF-β蛋白的结合界面相对较大,使得阻断这一靶点的抑制剂鲜有报道。因此在本论文中,我们将利用酵母表面展示技术,和在前期研究中已经建立的Vif蛋白突变体文库,通过流式细胞术筛选与CBF-β蛋白亲和力更强的Vif突变体,并根据获得的突变位点设计多肽类抑制剂,以阻断Vif介导的A3G降解,从而恢复其抑制HIV-1的能力。首先将CBF-β蛋白与前期构建的Vif突变体展示文库进行孵育,通过3轮流式分选,富集并获得了与CBF-β结合力强于野生型Vif的突变体。再通过扩增突变体的基因并进行序列比对,获得了30条突变体序列,其中与已报道的Vif与CBF-β结合相关的氨基酸位点重合率可达到32.14%,证明了本论文所使用筛选体系的可信度。随后根据获得的突变位点,设计了9条源于Vif突变体的小肽（9-18个氨基酸）,利用计算机软件进行分子对接后,筛选出了6条小肽进行合成,并对其抗HIV-1病毒感染及复制的能力进行了检测。结果表明小肽63M和108M具有抑制HIV-1感染作用,IC₅₀值分别为32.7μM和74.0μM,并且在一定浓度下具有抑制HIV-1复制的效果。接下来,对这两条小肽的细胞毒性、细胞摄入能力和抗病毒机制进行了研究。结果显示在浓度低于100μM时,63M和108M对多种细胞均无毒性作用,且HEK293T细胞能够有效摄入小肽。在探索63M、108M抗HIV-1机制的过程中,我们发现二者在体外和HEK293T细胞内均具有抑制Vif结合CBF-β的效果,同时可在胞内保护A3G蛋白不被降解,相应地提高了A3G蛋白在病毒粒子内的包装量。综上所述,通过本论文的研究,获得了两条针对Vif-CBF-β靶点的具有一定抗HIV-1功能的小肽,这些结果将有助于拓宽抗HIV-1肽类抑制剂的潜在研究靶点。在后续研究中,我们将以提高小肽稳定性和降低其IC₅₀值为目的对小肽进行修饰和优化,期望发现抑制能力更强的HIV-1肽类抑制剂。