猪囊尾蚴AgB基因氨基端和羧基端片段与猪CD58基因共表达DNA疫苗的构建及其免疫活性的初步分析

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国内外研究证明,用猪囊尾蚴AgB重组疫苗或DNA疫苗免疫小鼠或猪能有效地抵御猪带绦虫虫卵的攻击感染。本实验选取了猪囊尾蚴AgB氨基端(AgB-N 808bp)和羧基端(AgB-C 943bp)作为免疫原基因,并以共刺激分子猪CD58基因为佐剂基因来构建真核表达载体PBN和PBC,分别研究它们免疫BALB/c小鼠后所产生的免疫应答,从而为进一步研制猪囊尾蚴DNA 疫苗打下基础。本实验从ConA活化的猪外周血单个核细胞(PBMC)提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出800bp 的片段。将扩增产物连接到克隆载体中,经酶切鉴定、PCR分析以及确证性测序后证明,所克隆800bp的片段含CD58基因完整的开放阅读框,其核苷酸序列和氨基酸序列与国外发表的猪CD58基因的同源性分别为99.4%和99.2%。先将CD58插入双启动子真核表达载体pBudCE4.1的EF-1α启动子下游,构建表达载体PCD。再分别将AgB-N和AgB-C插入PCD的CMV启动子下游,制备DNA疫苗 PBN和PBC。分别免疫4周龄雌BALB/c小鼠,2周后加强免疫一次,每周用ELISA检测小鼠血清中的抗体水平,隔周用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖反应。结果表明DNA疫苗PBN和PBC均可引发机体产生体液免疫和细胞免疫,且PBN引发的细胞免疫强于体液免疫,PBC引发的体液免疫强于细胞免疫,但DNA疫苗产生的体液免疫弱于猪囊虫纯化抗原引发的体液免疫,强于猪囊虫纯化抗原引发的细胞免疫。
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