目的:研究刺猬蛋白(Shh)对体外小鼠耳蜗多潜能祖代细胞(CNPs)分化的影响,探讨促使毛细胞再生的有效方法。方法:体外分离培养出生后第一天小鼠的耳蜗多潜能祖代细胞,取第45-55代细胞,分为3组培养,分别为Shh组、LY294002+Shh组及PBS组,培养1天后用RT-PCR、荧光素酶检测系统,培养2天后用免疫荧光细胞化学技术和流式细胞仪等方法检测Shh诱导耳蜗多潜能祖代细胞早期分化的重要转录因子(mammalian atonal homolog 1,Math1 or Atoh1)的表达。并采用DNA含量流式细胞术细胞周期分析方法、BrdU细胞增生实验和细胞凋亡实验等方法,观察Shh对耳蜗多潜能祖代细胞增生过程的影响。结果: RT-PCR检测显示Shh诱导分化组的Math1 mRNA表达明显高于未诱导细胞,荧光素酶检测系统显示Shh诱导分化组的Math1启动子的转录水平明显高于未诱导细胞(p<0.05)。免疫荧光细胞化学技术、流式细胞仪显示Shh诱导分化组的Math1蛋白表达阳性率高于未诱导细胞(p<0.05)。荧光素酶检测系统和免疫荧光细胞化学技术分别证实抑制剂LY294002具有显著下调Shh对Math1启动子转录水平和Math1蛋白表达的作用(p<0.05)。细胞增生实验和细胞凋亡实验表明Shh对此细胞无明显促有丝分裂的效应。结论:出生后第一天小鼠的耳蜗多潜能祖代细胞,可在Shh的诱导下向耳蜗毛细胞的方向分化,而Shh对耳蜗多潜能祖代细胞的增生效应不明显。这一结果提示,耳蜗多潜能祖代细胞可在一定条件下分化为耳蜗毛细胞,在感音神经性耳聋的治疗方面具有临床应用前景。