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目的(1)研究预激方案(CAG方案)清除T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株A3细胞的作用机制及粒细胞集落刺激因子及其受体(G-CSF/G-CSFR)配体受体系统在此机制中所发挥的作用。方法(1)用G-CSFR单克隆抗体标记结合流式细胞术检测A3细胞表面G-CSFR的表达水平。(2)以A3细胞为体外实验模型,分组分别加入不同浓度的G-CSF(5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml;0ng/ml为对照组),培养箱内孵育48小时后收集细胞,碘化丙啶细胞核染色,于流式细胞仪检测A3细胞周期的变化。(3)以不同浓度的阿糖胞苷(Ara-C)联合G-CSF分别作用于A3细胞48小时后用Cell Counting Kit (CCK-8)试剂盒检测药物对A3细胞抑制率的影响。(4)AnnexinV试剂盒结合流式细胞术检测Ara-C、阿克拉霉素(ACR)及G-CSF联合作用48小时后A3细胞凋亡水平的变化。(5)Ras-MAPK通路中MEK的特异性抑制剂PD98059与G-CSF共作用于A3细胞48小时后流式细胞术分析其对细胞周期的影响,CCK-8检测细胞活力的变化。结果(1)流式细胞术测得A3细胞表面G-CSFR表达率达94.2%左右,SPSS 13.0统计分析显示其与阳性对照组急性粒细胞白血病细胞株(AML)KG-1细胞之间无显著性差异。(2)G-CSF作用48h后S期A3细胞比例在一定浓度范围内随G-CSF浓度的增加而逐渐升高,在G-CSF浓度为15ng/ml时达到最高,且与对照组的差异具有统计学意义,而后随G-CSF的升高却逐渐下降。(3)不同药物组作用48h后,CCK-8测得Ara-C+G-CSF组较单药Ara-C组抑制A3细胞生长更明显(Ara-C浓度10-5M和10-6M时P<0.05)。(4)AnnexinV凋亡试剂盒检测A3细胞早期凋亡百分率结果显示:Ara-C+ACR+G-CSF药物组细胞早期凋亡率高达38%左右,显著高于Ara-C+ACR药物组,差异具有统计学意义。(5)随着PD98059浓度的逐渐增大,A3细胞S期细胞比例及A3细胞的OD值均逐渐下降,分别在PD98059浓度为40μM～100μM和50μM～100μM时同对照组相比差异显著(p<0.05)。结论(1)T-ALL细胞株A3细胞表面可能高表达G-CSFR。(2)G-CSF/G-CSFR配体受体系统在CAG方案清除A3细胞的过程中,与化疗药物协同作用,即通过动员G0期细胞进入细胞增殖周期,增强化疗药物对细胞的敏感性从而清除细胞。(3)诱导凋亡可能是CAG方案清除T-ALL细胞株A3细胞的机制之一。(4)G-CSF与效应细胞表面特异性受体(G-CSFR)结合后,通过激活一系列下游信号传导通路来发挥作用,Ras-MAPK途径是其中之一;PD98059可能通过特异性抑制Ras-MAPK途径中MAPK的磷酸化,阻止传导信号的下传从而部分抑制G-CSF的效应。