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目的:检测miR-378a-5p在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)组织和细胞中的表达情况,并探究其对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响和相关分子机制。方法:采用qRT-PCR检测22对结直肠癌组织及其癌旁组织和结直肠癌细胞系中miR-378a-5p的表达,分别采用CCK-8实验、EDU实验、集落形成实验、伤口愈合实验、transwell实验、流式细胞术等评估细胞的增殖、迁移能力和凋亡、周期情况;结合裸鼠肿瘤形成实验评估miR-378a-5p在体内、体外对结直肠癌恶性进程的影响。结合数据库和荧光素酶报告基因检测确定CDK1为miR-378a-5p下游靶基因,TCGA数据库、q RT-PCR、免疫组织化学染色和细胞功能实验评估CDK1在结直肠癌中的表达及作用。功能回复实验验证CDK1上调是否能恢复miR-378a-5p过表达对结直肠癌细胞的影响。结果:1.miR-378a-5p在CRC组织和细胞中低表达:(1)TCGA数据库显示,与癌旁组织相比,结直肠癌组织中的miR-378a-5p表达下调(P<0.0001)。(2)q RT-PCR显示22对癌组织中miR-378a-5p表达明显低于其癌旁组织(P<0.001)。(3)同时q RT-PCR结果显示,结直肠癌细胞系中miR-378a-5p的表达明显低于正常肠上皮细胞系(P<0.001)。2.miR-378a-5p抑制CRC细胞的增殖和迁移能力:(1)EDU实验显示,与对照组相比,miR-378a-5p表达上调时增殖细胞减少,miR-378a-5p表达下调时增殖细胞增多(P<0.01)。(2)伤口愈合实验显示,miR-378a-5p过表达组48h的划痕较对照组宽,miR-378a-5p高表达组48h的划痕较对照组窄(P<0.01)。(3)同时Transwell实验显示,与对照组相比,miR-378a-5p过表达抑制细胞迁移,miR-378a-5p敲减则促进了细胞迁移(P<0.001)。3.miR-378a-5p促进结直肠癌细胞凋亡并在小鼠体内抑制瘤组织生长:(1)流式细胞术结果显示,与对照组相比,miR-378a-5p表达上调组细胞凋亡比率增加,而miR-378a-5p表达下调组细胞凋亡比率降低(P<0.01)。(2)使用慢病毒构建miR-378a-5p过表达裸鼠成瘤模型,结果显示miR-378a-5p lentirvius组肿瘤体积、重量均小于control lentirvius组(P<0.01)。4.CDK1是miR-378a-5p的下游靶基因并在结直肠癌组织和细胞中表达上调:(1)使用数据库Target Scan和RNAhybrid预测miR-378a-5p下游基因,发现miR-378a-5p和CDK1存在结合序列。进一步Luciferase实验显示,在CDK1 3’UTR野生型中,和对照组相比,过表达miR-378a-5p后荧光素酶活性显著降低(P<0.01),而在突变型中与对照组无明显差异。(2)Western blot实验显示,和对照组相比,CDK1蛋白表达在miR-378a-5p过表达后降低,在miR-378a-5p敲减后表达上调(P<0.05)。(3)q RT-PCR和TCGA数据库均显示CDK1在CRC组织中表达上调(均P<0.01)。(4)Kaplan-Meier生存分析显示,CDK1表达上调的CRC患者的OS明显低于CDK1表达下调的患者(P<0.05)。5.CDK1促进结直肠癌细胞的增殖和迁移:(1)CCK8实验显示,和各自对照组相比,CDK1过表达增强了细胞的增殖能力,CDK1敲减减弱了细胞增殖能力(P<0.001)。(2)Transwell实验显示,和各自对照组相比,CDK1上调增强了细胞的迁移能力,反之细胞迁移能力下降(P<0.001)。6.CDK1上调恢复了miR-378a-5p过表达对结直肠癌细胞恶性进程的抑制作用:(1)Western blot实验显示,单独过表达miR-378a-5p后CDK1蛋白水平较对照组明显下降,同时过表达miR-378a-5p和CDK1后,CDK1蛋白水平与对照组相似(P<0.05)。(2)克隆形成实验显示,过表达miR-378a-5p后细胞克隆数量较对照组减少,过表达CDK1后克隆数量增多(P<0.05),miR-378a-5p和CDK1同时过表达时细胞克隆数量和对照组相似。(3)细胞凋亡和周期检测结果发现miR-378a-5p过表达增加了在G2-M期的细胞数量,同时增加了凋亡细胞数量,而CDK1的上调则导致相反的趋势(P<0.01);miR-378a-5p和CDK1的共同上调后的结果趋势与对照组类似。结论:miR-378a-5p在CRC组织和细胞中低表达,能够抑制细胞的增殖和迁移;CDK1在CRC组织和细胞中高表达,能够促进细胞的增殖和迁移。且miR-378a-5p通过下调CDK1在CRC中发挥抑癌基因的作用。